孙亚杰，关平原，周伟光，徐晓静，希尼尼根，于景丽

（1.内蒙古农业大学兽医学院，农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，内蒙古呼和浩特 010018；2.内蒙古大学生态与环境学院，内蒙古呼和浩特 010021）

近年来，犊牛腹泻的发病率呈上升趋势，给养牛业造成了巨大经济损失。牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛轮状病毒（bovine rotavirus，BRV）和牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）是引起牛腹泻性疾病的3 种重要病原[1-3]。这些病原广泛分布于世界各地[1-4]。BVDV 主要侵害幼龄牛。牛感染BVDV 的临床症状主要表现为腹泻、肺炎、繁殖障碍和黏膜病等。该病传播迅速，感染率和发病率均较高[1]。BRV主要感染1～10 日龄犊牛。犊牛感染后临床表现为水样腹泻、严重脱水和酸中毒，成年牛感染后多呈隐性经过[2]。BCoV 是引起犊牛腹泻、成年牛冬血痢和呼吸道疾病的主要病原，主要导致新生犊牛出血性腹泻，成年牛冬季严重水样腹泻等[4-6]。

BVDV、BRV 和BCoV 混合感染频率较高，感染后患畜临床症状极为相似且不易识别[1-3，7]，因此建立一种针对BVDV、BCoV 和BRV 的快速准确、灵敏度高、特异性强的检测方法势在必行。传统的病原分离鉴定及血清学诊断方法不仅耗时费力，而且敏感性和特异性都较差[8]，已不能满足临床诊断需要。随着分子生物学的快速发展，PCR成为检测病原的首选方法。而多重PCR 方法可在同一PCR 反应体系中实现多种病原体或基因的同步检测，大大缩短了检测时间，节省了试剂用量[9]。实时荧光定量PCR（qPCR）在原有PCR 基础上与荧光检测方法结合，实现了PCR 从定性到定量的飞跃，具有灵敏度高、特异性强的优点[10-13]，还有效规避了普通PCR 污染环境和检测结果容易出现假阳性的弊端。……