APP下载

PCR 结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用

2021-03-07张富友于晓慧蒋文明孙淑红刘华雷

中国动物检疫 2021年3期
关键词:检测

张富友,于晓慧,蒋文明,孙淑红,赵 鹏,刘华雷,李 阳

(1.山东农业大学,山东泰安 271018;2.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266114)

鹦鹉幼雏病(budgerigar fledgling disease,BFD)是由禽类多瘤病毒(avian polyomavirus,APV),早期称为鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease virus,BFDV)引起的多种鹦鹉幼雏死亡的急性病毒性传染病,主要感染出壳1~3 周的鹦鹉,表现为厌食、消瘦、皮下出血、腹泻和呼吸困难等症状,死亡率可高达80%,并可感染其他多种禽类[1-2]。日龄较小的虎皮鹦鹉(budgerigar,Melopsittacus undulatus)感染APV 时常被称为“法国蜕皮(French molt)病”[3]。该病1981 年首次报道于美国和加拿大[4-5],随后迅速蔓延到日本、意大利、德国和匈牙利等国家[2,6]。1994 年我国湖北省云梦县和山东省青岛市首次报道发生BFD[7-11]。此后,该病在我国饲养鹦鹉较多的许多省市广泛传播,如湖北、山东、广东等,给我国伴侣鸟贸易和鹦鹉养殖业造成较大经济损失。

APV 属于多瘤病毒科(Polyom aviridae)多瘤病毒属(Polyom avirus),是一种无囊膜的双链DNA 病毒,病毒粒子直径为40~50 mm[4,12],大小约为5 kb[13]。APV 基因组分为早期、晚期基因编码区及非编码区。早期编码区编码1 个大肿瘤抗原(大T 抗原)和1 个小肿瘤抗原(小t 抗原);晚期编码区编码主要结构蛋白VP1 和3 个次要结构蛋白VP2、VP3 和VP4。VP1 蛋白是主要的保护性抗原,而3 个次要蛋白也存在于病毒衣壳中[13-14]。APV 非编码区可能含有复制起始位点和早期及晚期启动增强序列。

目前,该病主要根据临床表现和组织学观察作出初步诊断,而确诊需要进行电镜观察、病毒中和试验或PCR 检测。但现有的检测方法都存在一定的局限性及非特异性。为提高分子生物学方法检测APV 的敏感性和特异性,本研究通过用地高辛(digoxinum,DIG)标记核酸探针,建立了一种快速、灵敏、特异的APV 检测方法,并对鉴定阳性的APV 进行了完整的基因组测序以及遗传特性和进化程度分析。……

登录APP查看全文

猜你喜欢

检测
QC 检测
小波变换在PCB缺陷检测中的应用