七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR 检测结果的影响
2021-03-07南文龙巩明霞王清华吴晓东陈义平
南文龙,巩明霞,陆 游,2,李 林,王清华,吴晓东,陈义平
(1.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032;2.扬州大学兽医学院,江苏扬州 225009)
非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是我国生猪产业持续健康发展的重大威胁。目前,该病防控依赖于严格的生物安全措施,有效的消毒可直接阻断ASFV传播,是非洲猪瘟(African swine fever,ASF)防控的关键。
为做好ASF 防控工作,我国农业农村部发布的《感染非洲猪瘟养殖场恢复生产技术指南》、《非洲猪瘟疫情应急实施方案》(2020 年第二版)、《非洲猪瘟常态化防控技术指南(试行版)》等系列文件中,均对ASF 防控用消毒剂种类和使用方法进行了推荐。现场消毒后,常需对消毒效果进行评估,实践中最常用方法为荧光定量PCR。由于消毒剂灭活病毒机制不同,本研究拟采用荧光定量PCR方法检测戊二醛、酚、含氯等7 类9 种常用消毒剂与ASFV 培养物作用后的产物,评估对检测结果的影响,以期为ASF 防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。
1 材料与方法
1.1 消毒剂
收集市面常见的戊二醛、酚、含碘、季铵盐、含氯、过硫酸氢钾、二氧化氯等7 类消毒剂,包括戊二醛类2 种、酚类1 种,含碘类2 种、季铵盐1 种、含氯类1 种、过硫酸氢钾类1 种、二氧化氯类1 种。消毒剂产品详细信息见表1,所有产品均注册有兽药产品批准文号,试验时均在有效期内。
1.2 病毒
ASFV 中国分离株:CN2018/1,由国家非洲猪瘟参考实验室分离鉴定并保存。
1.3 试剂与耗材
DMEM 培养基、胎牛血清,购自GIBCO 公司;细胞瓶及96 孔细胞板,购自Corning 公司;病毒RNA/DNA 提取试剂盒,购自天根公司;荧光定量PCR 扩增试剂Luna 通用探针法qPCR 预混液,购自NEB 公司。……
