张 翔，林婷婷，刘丰波，宋姗姗，李 彬，栾栋祖，王群义，刘 平，刘红祥，马 冬，任衍倍，刘 东，3

（1.青岛易邦生物工程有限公司，山东青岛 266000；2.青岛农业大学动物医学院，山东青岛 266109；3.动物基因工程疫苗国家重点实验室，山东青岛 266000）

禽戊型肝炎病毒（avain hepatitis E virus，aHEV）属于肝炎病毒科正戊肝病毒属B 种，是一种无囊膜的单股正链RNA 病毒[1]，主要流行4 个基因型：澳大利亚和韩国的基因1 型，美国的基因2 型，中国和欧洲的基因3 型，匈牙利和中国台湾的基因4 型[2]。该病原引起的疾病最早可追溯到20 世纪80 年代澳大利亚、美国、加拿大等陆续报道的鸡大肝大脾病（big liver and spleen disease，BLS）或肝炎脾大综合征（hepatitis-splenomegaly，HS）[3-5]，2001 年确定病原并命名为禽戊型肝炎[6]。1994 年我国就有BLS 抗体阳性的报告，2010 年和2014 年分别从肉种鸡和蛋鸡群中分离到aHEV[7-8]。

aHEV 多感染产蛋期鸡群，病程为1～2 个月甚至更长，临床主要表现为死淘率升高（5%～15%）。剖检可见，肝脾肿大、出血，卵泡萎缩变形等，后期易继发细菌感染。为分析我国aHEV 基因变异情况，对2018 年从山东、河南、河北、辽宁、吉林、黑龙江、陕西、山西、江苏等地疑似感染aHEV鸡群中采集的肝脏、脾脏病料样品进行aHEV RTPCR 检测，并对aHEV 阳性产物进行ORF1基因序列测定与遗传进化分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 2018 年采集山东、河南、河北、辽宁、吉林、黑龙江、陕西、山西、江苏9 个省份疑似aHEV 感染的鸡肝脏、脾脏样品共计679 份，无菌处理后，置于-20 ℃保存备用。

1.1.2 试剂 RNAout 提取试剂盒，购自天恩泽生物公司；HiScript®II One Step RT-PCR Kit，购自诺唯赞生物公司；DL 2 000 DNA Marker，购于宝生物工程（大连）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 引物设计 参照GenBank 已公布的aHEVORF1基因核苷酸序列，利用Oligo 6.0 软件设计扩增aHEV-ORF1基因的特异性引物（aHEV-ORF1-F：5'-FCGTCTCGCAGATAGCAGAGTCC-3'；……