杨家耀，易宏锋，廖 艳，舒 磊，杜念龙，陈 露，黎晨玉，安 柳，邹 琦，时昭红△

(1. 武汉市第一医院消化内科，武汉 430022； 2. 湖北中医药大学， 武汉 430065)

随着人们生活水平的提高，饮食的不规律性，以肝内脂肪过度沉积为主要临床特征的非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)已成为一种发病率较高的疾病，对人们的健康产生极大威胁[1-3]。近些年，中医因整体思维及辨证论治优势，在NAFLD的理论、临床及实验研究中均取得了大量的成绩。中医疗法治疗NAFLD主要有单味药及其有效成分、中药复方、针灸及推拿等[4]。其中通过临床研究表明，一些中药复方对治疗NAFLD疗效较为显著[5-6]。过往中药复方治疗NAFLD的研究主要集中于临床及动物水平，而细胞水平的研究还相对较少。本课题前期成果已证明，3种汤药中附子理中汤对NAFLD的作用效果最佳，但尚未深入探究其具体作用机制[7]。本研究在前期研究的基础上，拟通过细胞水平实验揭示附子理中汤对NAFLD的作用机制，为临床治疗奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

细胞来源及培养：正常人肝细胞株HL-7702购自中国科学院细胞库(货号GNHu6)。细胞经复苏后，培养于含10% FBS、100 U/ml PNC以及100 mg/ml链霉素的DMEM中。细胞在常规条件下培养至80%融合，洗涤、收集细胞继续培养用于后续造模实验。

1.2 主要药物及试剂

中/长链脂肪乳注射液(货号C6-24)购自华瑞制药有限公司；附子理中汤出自《三因极一病证方论》卷二中寒治法，按传统方法制备煎煮液浓缩后备用(所有药物在使用时均采用无血清培养基稀释至指定浓度)；Human INF-α ELISA Kit(货号HM10251)、Human INF-β ELISA Kit(货号HM10099)和Human IL-10 ELISA Kit(货号HM10203)购自武汉贝茵莱生物科技有限公司；……