李伟霞 王晓艳 贾文汇 张明亮 唐进法 李学林

摘 要 目的：研究脑心通胶囊主要药效成分对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）JAK/STAT信号通路、血管活性物质、黏附分子、炎症因子的影响，以期阐明脑心通胶囊活血化瘀的作用机制。方法：采用CCK-8法检测不同浓度的12个脑心通胶囊药效成分[咖啡酸（1.56～200 μmol/L）、阿魏酸（1.56～200 μg/mL）、洋川芎内酯H（3.125～200 μmol/L）、丁烯基苯酞（3.125～200 μmol/L）、藁本内酯（1.56～200 μmol/L）、隐丹参酮（0.625～80 μmol/L）、丹参素钠（1.56～200 μmol/L）、芍药苷（1.56～200 μmol/L）、芒柄花素（1.56～200 μmol/L）、丹酚酸B（1.56～200 μmol/L）、儿茶素（1.56～200 μmol/L）、黄芪甲苷（1.56～200 μmol/L）]作用24 h后对HUVEC增殖的影响;采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测上述各药效成分（均分别设置3个剂量组，并设0 μmol/L的空白对照组，下同）对HUVEC的JAK/STAT信号通路关键蛋白Janus激酶（JAK2）、信号转导子及转录激活子（STAT3）、蛋白激酶B（Akt）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）mRNA表达的影响;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各药效成分对HUVEC的纤溶酶原激活物抑制因子1（PAI-1）、血管内皮细胞黏附分子1（VCAM-1）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子κB p65（NF-κB p65）表达的影响。结果：阿魏酸（6.25、25～200 μg/mL）、洋川芎内酯H（6.25～200 μmol/L）、藁本内酯（200 μmol/L）、隐丹参酮（10～80 μmol/L）、芍药苷（1.56、6.25、12.5 μmol/L）、丹酚酸B（1.56～12.5、200 μmol/L）和儿茶素（25 μmol/L）可显著抑制HUVEC增殖，咖啡酸（1.56、12.5 μmol/L）、藁本内酯（50 μmol/L）、丹参素钠（6.25 μmol/L）、芒柄花素（1.56、100、200 μmol/L）可显著促进HUVEC细胞增殖（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较，阿魏酸、芒柄花素、丹酚酸B和黄芪甲苷部分剂量组细胞中JAK2、STAT3和Akt的mRNA相对表达量均显著降低（P<0.05或P<0.01）;咖啡酸、阿魏酸和丁烯基苯酞部分剂量组细胞中PAI-1表达水平显著降低，咖啡酸、阿魏酸、丁烯基苯酞、隐丹参酮、芒柄花素和儿茶素部分剂量组细胞中ICAM-1和VCAM-1表达水平显著降低，阿魏酸、丁烯基苯酞、芒柄花素、丹酚酸B和黄芪甲苷部分剂量组细胞中NF-κB p65表达水平显著降低，咖啡酸和儿茶素部分剂量组细胞中VEGF表达水平显著升高（P<0.05或P<0.01）。结论：脑心通胶囊中药效成分可能通过抑制HUVEC中JAK/STAT信号通路关键蛋白mRNA和PAI-1、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB p65的表达，并促进VEGF表达，从而发挥其活血化瘀的功效。

关键词 脑心通胶囊;人脐静脉内皮细胞;血管活性物质;黏附分子;炎症因子;药效成分;JAK/STAT信号通路;作用机制

中图分类号 R285.5 文獻标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）03-0301-08

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.03.09

ABSTRACT   OBJECTIVE： To study the effects of the main active components of Naoxintong capsule （NXTC） on the JAK/STAT signal pathway of human umbilical vein endothelial cell （HUVEC） vasoactive substances， adhesion molecules and inflammatory factors so as to clarify the mechanism of NXTC for promoting blood circulation and removing blood stasis. METHODS： The effects of different concentration of 12 active components [caffeic acid （1.56-200 μmol/L）， ferulic acid （1.56-200 μmol/L）， senkyunolide H （3.125-200 μmol/L）， n-butylidenephthalide （3.125-200 μmol/L）， ligustilide （1.56-200 μmol/L）， cryptotanshinone （0.625-80 μmol/L）， tanshinol sodium （1.56-200 μmol/L）， paeoniflorin （1.56-200 μmol/L）， formononetin （1.56-200 μmol/L）， salvianolic acid B （1.56-200 μmol/L）， catechin （1.56-200 μmol/L） and astragaloside Ⅳ （1.56-200 μmol/L）] on the proliferation of HUVECs were evaluated by CCK-8 assay. The effects of above active components （3 dose groups， setting up 0 μmol/L blank control group， hereinafter） on mRNA expression of key proteins JAK2， STAT3， Akt， ERK in JAK/STAT signal pathway were measured by RT-PCR. The effects of each active component on the expression of PAI-1， VCAM-1， ICAM-1， VEGF and NF-κB p65 were detected by ELISA. RESULTS： Ferulic acid （6.25，25-200  μg/mL）， senkyunolide H （6.25-200 μmol/L）， ligustilide （200 μmol/L）， cryptotanshinone （10-80 μmol/L）， paeoniflorin （1.56， 6.25， 12.5 μmol/L）， salvianolic acid B （1.56-12.5 μmol/L， 200 μmol/L） and catechin （25 μmol/L） could significantly inhibit the proliferation of HUVECs; caffeic acid （1.56， 12.5 μmol/L）， ligustilide （50 μmol/L）， trashinol sodium （6.25 μmol/L） and paeoniflorin （1.56， 100， 200 μmol/L） could significantly promote the proliferation of HUVECs  （P<0.05 or P<0.01）. Compared with blank control group， mRNA expression of JAK2， STAT3 and Akt were decreased significantly in some dose groups of ferulic acid， formononetin， salvianolic acid B and astragaloside Ⅳ （P<0.05 or P<0.01）; the expression of PAI-1 were significantly decreased in some dose groups of caffeic acid， ferulic acid and n-butylphthalide; the expression of ICAM-1 and VCAM-1 were decreased significantly in some dose groups of caffeic acid， ferulic acid， n-butenylphthalide， cryptotanshinone， formononetin and catechin; the expression of  NF-κB p65 were decreased significantly in some dose groups of ferulic acid， n-butenylphthalide， formononetin， salvianolic acid B and astragaloside Ⅳ; the expression of VEGF were increased significantly in some dose groups of caffeic acid and catechin （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： The active components of Naoxintong capsule may play the role of promoting blood circulation and removing blood stasis by inhibiting the expression of JAK/STAT signal pathway key protein mRNA and PAI-1， ICAM-1， VCAM-1， NF-κB p65 in HUVEC， and promoting the expression of VEGF.

KEYWORDS   Naoxintong capsule; Human umbilical vein endothelial cells; Vasoactive substances; Adhesion molecule; Inflammation factors; Active component; JAK/STAT signal pathway; Mechanism

脑心通胶囊组方是在《医林改错·卷下·瘫痿论》中补阳还五汤的基础上加味虫类药、活血化瘀药共16味中药而成，具有益气活血、化瘀通络的功效[1-2]。相关研究报道，脑心通胶囊主要通过抗动脉粥样硬化、抗炎性反应、抗血小板聚集、改善血管内皮功能和抗心肌缺血再灌注损伤等药理作用发挥治疗心脑血管疾病的作用[1-4]。……