郑大炜，郭娜

南阳市中心医院呼吸科(河南南阳 473009)

肺癌是全球发病率和病死率排名靠前的恶性肿瘤之一，我国更是肺癌患病大国，2014年全国肿瘤登记中心的数据显示我国肺癌发病率为35.23/10万，在全部恶性肿瘤发病中占19.59%；病死率为27.93/10万，在全部恶性肿瘤发病中占24.87%[1-2]。而非小细胞肺癌(non-small cell lung cance,NSCLC)在所有肺癌患者中高达85%，5年生存率低至15%[3]。究其原因发现，术后肿瘤复发和转移是影响NSCLC患者预后的重要原因[4]。研究显示，手术联合化疗在一定程度上可延长患者的生存时间，但也易对患者造成一定损伤影响其生活质量[5]。因此明确肺癌发病机制，寻找新的NSCLC治疗靶点和药物，为患者提供更好的诊疗手段，延长患者生命，提高生活质量，是目前甚至将来最主要的任务之一。半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (Cystatin C,Cys C)是一种属于Cys Ⅱ家族的分泌型蛋白，又称CST3，可抑制包括半胱氨酸蛋白酶在内的多种蛋白水解酶活性，在炎性反应及肾癌、卵巢癌、结直肠癌等恶性肿瘤发生、发展中有一定影响[6-7]。但目前在NSCLC中的研究报道较少。2017年5月至2018年12月，本研究通过构建CysC-shRNA慢病毒载体，探讨CysC对NSCLC细胞增殖的影响及可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料 NSCLC A549细胞、TOP10大肠杆菌感受态细胞和293T细胞购自中国科学生命院上海细胞研究所；RPMI-1640培养基、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶和青霉素-链霉素溶液均购自美国Gibco公司；T4连接酶、限制性内切酶Age Ⅰ和EcoR Ⅰ及连接试剂盒均购自美国NEB公司；慢病毒载体Pglv2-U6-Puro及包装质粒购自上海吉玛基因化学有限公司；质粒提取试剂盒、RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒及转染试剂盒Lipofectamine购自美国Invitrongen公司；……