张博慧，贾戴辉，许俊彦

（宝船生物医药科技（上海）有限公司药物分析部门，上海 201203）

吐温80又名聚山梨酯80，其化学名为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯，作为助溶剂、乳化剂和稳定剂，常用于治疗性单克隆抗体注射液制剂中[1]。近年来，关于吐温80能够诱发过敏反应的报道越来越多[2-6]，建立一种准确有效的测定吐温80含量的方法尤为重要。

目前，用于检测吐温80含量的方法主要有比色法[7]、高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）检测法[8]、水解法[9]、质谱法[10-11]等。比色法因对设备要求比较低而应用广泛，但该方法耗时、重复性较差，且对蛋白浓度较高样品适用性差；HPLC-ELSD法检测结果较准确，应用范围较广，但是ELSD系统易受蛋白污染而影响检测结果；水解法是将吐温80水解成油酸，利用高效液相色谱-紫外检测器检测，该方法耗时较长，易受油酸稳定性的影响；质谱法需要使用昂贵的仪器，因此使用范围受限。本研究建立了采用高效液相色谱仪配备荧光检测器检测单克隆抗体中吐温80含量的方法，并进行了方法学验证。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试品单抗1、单抗2、单抗3均为宝船生物医药科技（上海）有限公司生产的单克隆抗体注射液；Humira（修美乐）购自雅培公司；Opdivo（欧狄沃）购自百时美施贵宝公司；Erbitux（爱必妥）购自默克公司。

1.2 试剂与仪器

吐温80（药用级）购自威尔药业；十水四硼酸钠（ACS试剂级）、N-苯基-1-萘胺（NPN， 98%）均购自Sigma公司；氯化钠（HPLC级）购自阿拉丁公司；乙腈（ACN， HPLC级）购自Fisher公司；反应线圈（Reaction coil 750 μL）购自赛默飞公司；1260高效液相色谱仪，安捷伦，配备荧光检测器。……