刘晓芳，刘琼，黄云祥，钟引凤，何庆华，李燕萍，涂追，付金衡*

（1.南昌大学 生命科学学院，江西南昌 330031；2.中德联合研究院，江西南昌 330047；3.食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌 330047；4.南昌大学基础医学院，江西南昌 330031）

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种慢性感染的病原菌，世界卫生组织将其定为Ⅰ类致癌原[1]，细胞空泡毒素（Vacuolating cytotoxin，Vac A）是Hp产生并经自转运蛋白途径分泌到胞外的蛋白，在体外能使宿主细胞产生空泡变性，VacA还可引起线粒体膜通透性改变，抑制细胞凋亡[2]、诱导肿瘤细胞自噬[3]、促进HCO3-释放并降低胃酸分泌[4]等。针对特异性识别VacA的研究主要体现在肽[5]、单链抗体（scFv）[6]、卵黄抗体[7]和单克隆抗体[8]，然而具有亲和力高、稳定性好、免疫原性低、分子量小、易于基因工程改造的纳米抗体[9-10]却未见报道。

因此，本实验聚焦抗Hp细胞空泡毒素纳米抗体的研究，构建了纳米抗体噬菌体免疫文库，采用固相亲和淘选技术，从该文库中获得了抗幽门螺杆菌VacA纳米抗体，通过基因工程技术获得了原核表达的纳米抗体，并进行了初步功能鉴定，为抗幽门螺杆菌VacA纳米抗体的应用奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂

幽门螺杆菌J99菌株质粒由南昌大学基础医学院刘琼讲师提供；大肠杆菌TG1、噬菌粒载体pComb3XSS、辅助噬菌体M13KO7、原核表达载体（pET25b）为实验室保存；卵清蛋白（OVA）、牛血清蛋白（BSA），购自上海生工生物工程有限公司；TA克隆试剂盒购自Takara；EasyGeno快速重组克隆试剂盒购自天根生化科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 获取幽门螺杆菌VacA基因及原核表达

据……