王志强,关超玲,朱 辉,李贤慧

骨性关节炎(Osteoarthritis，OA)是中老年常见的关节疾病，而且目前国内外尚缺乏疗效确切的药物[1]。骨性关节炎病程进展非常缓慢，在核磁共振或X线放射照相能检出半月板或关节软骨损伤之前，病理损伤仅仅是韧带退化、滑膜炎等早期症状[2]。这种缓慢退化时间可长达4年以上[3]，这是非常重要的预防保健窗口期，如能采取有效措施或许可以恢复健康[4]。研究表明骨性关节炎最早的病理改变是关节液中重要润滑分子透明质酸和蛋白聚糖-4分泌减少，但分泌减少的原因目前尚不清楚[5]。笔者前期研究表明1,25(OH)2D3对关节滑膜的分泌功能有调节作用，能促进透明质酸的分泌[6]。蛋白聚糖4(proteoglycan 4, PRG4)和透明质酸均是关节滑液中的重要分子，对保持关节滑液的边界润滑功能起决定作用。本研究旨在探讨1,25(OH)2D3对关节滑膜PRG4基因表达及分泌的影响。

1 材料与方法

1.1 主要仪器试剂 EL311SX 酶联免疫检测仪；7700型定量PCR仪，美国ABI公司；兔蛋白聚糖-4 ELISA试剂盒为美国Abcam公司产品；1,25(OH)2D3为Sigma公司产品；TrizolTM试剂为Invitrogen公司产品。

1.2 兔膝关节滑膜组织分离培养 健康7月龄新西兰大白兔，体重(3.3±0.2)kg，常规技术取滑膜，放入6孔培养板中培养。

1.3 1,25(OH)2D3对关节滑膜PRG4基因表达和滑膜分泌PRG4影响的时间谱分析 根据笔者前期获得的实验数据，选择1,25-(OH)2D3终浓度为10 nM进行时间谱分析。新分离滑膜普通培养24 h后，滑膜培养液中加入1,25-(OH)2D3进行实验。滑膜PRG4基因表达量和滑膜分泌PRG4进入培养液的量可同时分析。按作用时间分为七组，分别为0 h(对照)，12、24、36、48、60、72 h组。在指定时间分别收取滑膜培养液和滑膜。……