胡亚婕，刘 洋，姚睿智，史宏昭，刘 鹏，徐 彬，吕红明，李士泽

(黑龙江八一农垦大学动物科技学院，动物医学基础国家级实验教学示范中心；黑龙江省牛病防治重点实验室，大庆 163319)

寒冷是北方畜牧业常见应激源之一，常诱导禽畜产生冷应激反应。在寒冷条件下，动物机体主要通过增强自身代谢活动和骨骼肌收缩来增加产热从而维持体温恒定。因此，冷暴露中骨骼肌的功能及能量水平对维持机体运动能力起着十分重要的作用。此外，骨骼肌除了作为运动器官，还可以作为分泌器官分泌细胞因子，即肌细胞因子(myokines)[1]。其中，IL-6作为骨骼肌分泌的重要肌细胞因子之一，通过骨骼肌收缩产生、表达和释放，参与机体能量代谢[2-3]。而蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰是细胞内一种蛋白翻译后修饰方式，O-GlcNAc糖基化修饰可以在机体应激中充当一种“应激感受器”，参与细胞信号转导，蛋白质-蛋白质相互作用或基因表达[4-5]。因此，本试验使用小鼠成肌细胞系C2C12，检测不同时长冷暴露下O-GlcNAc糖基化修饰及相关蛋白O-GlcNAc催化转移酶(O-GlcNAc transferase，OGT)、O-GlcNAc水解酶(O-GlcNAcase，OGA)和IL-6表达变化。初步探讨冷暴露下O-GlcNAc糖基化与IL-6表达之间的联系。

1 材料与方法

1.1 材料

小鼠成肌细胞系C2C12为黑龙江八一农垦大学应激实验室保存。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 主要试剂 DMEM高糖培养基、双抗购自美国Gibco公司；胎牛血清购自美国Clark Bioscience公司；RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、PMSF(100 mmol·L-1)、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液、10×TBST购自中国碧云天生物技术有限公司；ECL显色液、PVDF膜(0.22 /0.45 μm)购自美国默克密理博公司。……