鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
2021-03-01王淑娟班付国王东方赵雪丽谢彩华马震原杨海波闫若潜
王淑娟,班付国,王东方,刘 影,赵雪丽,谢彩华,王 翠,马震原,杨海波,柴 茂,闫若潜
(河南省动物疫病预防控制中心, 郑州 450008)
非洲猪瘟(African swine fever, ASF) 是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、高度接触性传染疫病[1],可引起猪高热、精神沉郁、皮肤发绀、食欲废绝、出血性病变和共济失调,并伴有严重的血小板和淋巴细胞减少,感染动物通常在感染后10~14 d内死亡,病死率可达100%[2]。ASFV基因组为双链DNA,大小170~194 kb[3]。病毒基因可编码200多种蛋白质,其中,结构蛋白有54种,P72是一种结构蛋白,是病毒衣壳的主要组成部分,P72基因序列保守,不同毒株之间都有相同的保守序列[4]。
猪瘟(classical swine fever, CSF)是由猪瘟病毒(CSFV) 引起的一种高致死性、烈性传染病[5],以稽留高热、出血、母猪流产为主要特征。该病主要通过呼吸道和消化道传染,传播速度快,发病率和死亡率都很高,给全球养猪业带来巨大的经济损失[6-7]。CSFV 属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus),为单股正链RNA病毒。CSFV基因组全长12.3 kb,主要由5′非编码区(5′UTR)、开放阅读框(ORF)和 3′非编码区(3′UTR)3部分组成,5′UTR 由360~374个碱基组成,具有很高的保守性,能够形成复杂稳定的二级结构[8]。
非洲猪瘟和猪瘟引起的临床症状极为相似,必须借助实验室检测进行鉴别诊断。目前,非洲猪瘟病毒的检测方法很多,血清学方法有间接 ELISA、阻断 ELISA和间接荧光抗体试验;病原学方法有病毒的细胞培养和分离、直接免疫荧光、双抗体夹心ELISA、普通PCR和荧光定量PCR (FQ-PCR) 等,其中,OIE 推荐的普通PCR和荧光定量 PCR 是最为常用的实验室检测方法[9]。现有的CSFV诊断方法有免疫荧光、ELISA、病毒分离、RT-PCR等,但这些方法都存在敏感性、特异性低及耗时等不足,且不能区分野毒株和疫苗株[10-12]。……
