吉梦梦 孟祥平 冯小倩 徐欣欣 张玉清 秦 宇

(河南科技大学医学技术与工程学院，洛阳 471000)

HIV-1是反转录病毒科慢病毒属成员，它的基因组是双正链 RNA，主要侵犯人体的CD4+T淋巴细胞和巨噬细胞。当HIV-1进入宿主细胞后，其正链RNA开始反转录合成双链DNA。HIV-1 反转录的过程一般包括以下步骤：①负链强终止DNA(-sssDNA)的合成；②长负链DNA的合成；③正链强终止DNA(+sssDNA)的合成；④完整的双链DNA合成[1]。最后合成的完整DNA两端含有LTR序列，又叫HIV-1晚期反转录产物(HIV-1 late RT)，因此在检测反转录过程完整的 DNA双链时，应当检测 LTR/Gag序列[2]。反转录过程是HIV-1病毒复制的关键环节，已成为研发抗HIV-1药物的重要靶点[3]。恒河猴TRIM5α属于三重基序蛋白(tripartite motif protein，TRIM)大家族的成员，通过多种机制抑制HIV-1，而人的TRIM5α作用较弱[4-8]。将人TRIM5α中结合衣壳蛋白的B30.2(SPRY)结构域用同样结合衣壳蛋白的亲环素A(CyPA)代替，构建人源的hTRIMCyPA以避免异种蛋白的免疫排斥反应。因此推测hTRIMCyPA也能特异识别并结合HIV-1衣壳蛋白，并影响衣壳蛋白的脱壳，抑制病毒的RNA反转录成DNA[4-5]。虽然临床有效的抗反转录病毒治疗(HAART)提高了艾滋病的临床疗效，但因HIV-1的高度变异性和潜伏感染，存在药物疗效不佳和毒副作用大的问题[9-10]。因此，本研究采用假病毒系统建立一种可分析感染细胞内病毒生命周期早期特异性DNA 产物的相对荧光定量 PCR技术，并以其评价hTRIMCyPA对HIV-1的抑制作用。这对于未来抗HIV-1相关病毒新药的研发具有重要的意义。

1 材料与方法

1.1材料 蛋白酶K、DNase Ⅰ购自Sigma公司；SYBR Green Master Mix(Low Rox)购自上海翊圣生物科技有限公司；EZTrans细胞转染试剂购自上海李记生物；荧光素酶检测试剂盒购自碧云天生物技术公司；……