郑聪聪，周海龙，赵晶晶，李宪臻，杨 帆

(1.大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034；2.中国生物发酵产业协会，北京 100833)

0 引 言

菊糖是一种可以生产燃料乙醇的优质能源生物质。然而，自然界中只有极少数微生物可以直接转化菊糖为乙醇[1-2]。酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)能够高效转化生物质生产乙醇，且易于培养、遗传操作平台成熟[3]。然而，绝大多数酿酒酵母菌株不能直接水解菊糖为可发酵糖[4-5]。有文献表明，蔗糖转化酶SUC2是酿酒酵母水解菊糖的关键酶，它的表达水平直接影响酿酒酵母水解菊糖产乙醇的能力[6]。目前，天然酿酒酵母菌株中SUC2的表达水平非常低，严重阻碍了菊糖基乙醇的工业化生产进程[7-8]。

酿酒酵母α交配因子(αF)是一种肽激素效应物，仅由α型单倍体细胞分泌，指引该细胞与相反配型的单倍体细胞进行接合[9]。α交配因子的前体进入细胞的分泌系统，并在分泌后期被胞内外蛋白质水解酶加工为成熟的αF[10]。国内外已有多项研究利用α交配因子的分泌信号肽融合目标蛋白以提高其分泌表达水平，如来自马克斯克鲁维酵母的菊糖酶和羧肽酶等，均取得了较好的效果[11-13]。

目前，还没有文献报告利用融合分泌信号肽有效提高酿酒酵母SUC2分泌水平。本实验克隆获得α交配因子的分泌信号肽编码基因，并将其与SUC2编码基因上游进行融合，随后转化至酿酒酵母进行分泌表达，旨在为理性改造酿酒酵母使其高效转化菊糖产乙醇提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

酿酒酵母S.cerevisiaeBY4741、EscherichiacoliDH10B，获赠于大连化学物理研究所赵宗保研究员课题组。……