赵 玺，李向宇，丁 锐，赵浩然，米丛波，吴晓琴

人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts，hPDLF)是一个异质性细胞群，参与牙周组织的改建和再生，hPDLF细胞在特定的刺激下，能够促进其向成骨细胞分化，参与组织的修复和牙槽骨的改建[1-4]。亦有研究表明[5]，雌激素与其受体结合后能够促进牙周膜成纤维细胞在骨重建过程中核因子κB受体活化子配体及骨保护素的表达，进而影响牙槽骨的重建。正畸治疗时机械力作用于牙齿通过牙周膜传递至牙槽骨，继而牙槽骨发生生物改建，包含了成骨细胞和破骨细胞的分化成熟[6-8]，所以，本文即探究联合使用雌激素和机械治疗能否影响hPDLF细胞的成骨分化及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

α-MEM培养基(美国Gibco公司)；17β-雌二醇(美国Sigma公司)；cDNA合成试剂盒、qPCR检测试剂盒(南京福麦斯生物技术有限公司)；酶标仪(美国BioTek公司)；实时定量PCR仪(美国Applied Biosystems公司)；茜素红染色液(沈阳万类生物技术有限公司)；骨钙素(osteocalcin，OCN)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)、β雌激素受体(Estrogen Receptor-β, ER-β)、蛋白激酶B(protein kinases, Akt)、p-蛋白激酶B(p-protein kinases, p-Akt)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)一抗，山羊抗兔二抗(武汉三鹰生物技术有限公司)，FX-5000T应力加载系统(购自美国 FlexCell公司)。

1.2 人牙周膜成纤维细胞的分离与鉴定

收集健康正畸患者的健康前磨牙6颗，患者年龄18～25岁，征得患者的知情同意。取得患者前磨牙样本后迅速转移至无菌的超净工作台中，用无菌的PBS溶液冲洗3次，然后用无菌手术刀片刮取根中1/3区域的牙周膜组织，将组织转移至α-MEM培养基中，使用无菌眼科剪将组织剪成1 mm3，研磨均匀，将牙周膜组织碎块均匀放置在6孔板中，加入含10%胎牛血清的α-MEM培养基，于37 ℃、5%CO2培养箱中培养，隔天更换培养基，细胞生长至汇合率达80%时，使用0.25%的胰蛋白酶消化，传代。……