李长超，柴艳梅，刘 丹，周 成，陈 蓉，黄文峰

(1.荆门市第二人民医院，湖北 荆门 448000；2.西安市第五医院，陕西 西安710082 )

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是以关节滑膜炎症为主的一种慢性自身免疫性疾病，在世界范围内的发病率约为1%[1]。研究表明免疫细胞、细胞因子参与RA的发病过程，其中辅助性T 细胞17(T helper cell 17，Th17)在RA发病中起重要作用[2-3]。研究[4]发现，Th2细胞具有抑制Th17的作用，激活后的CD4+Th2细胞可生成白细胞介素-13(Interleukin-13，IL-13),不仅具有免疫刺激功能,上调CD28配体和CD80的表达，还有重要的抗炎功能,下调肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、IL-6及IL-1β等促炎细胞因子的生成。目前关于IL-13在RA发病中的具体作用和相关分子机制仍不明确，本研究通过分析IL-13与RA患者病情的相关性，观察IL-13对Th17细胞亚群分化的影响，探讨其在RA免疫调控中的可能机制，为IL-13相关生物制剂的临床应用提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2018年1月至2019年6月就诊的RA患者60例，根据RA 28个疾病活动性评分(DAS28)分为活动组(DAS28评分≥2.8，n=30)和稳定组(DAS28评分<2.8，n=30)。另选体检中心健康志愿者30例作为正常组。RA诊断符合2010 年 ACR 与欧洲风湿病学会(EULAR)联合修订的 RA 分类标准。排除标准：有严重心肺功能异常；骨髓造血障碍疾病、胃十二指肠溃疡活动期；正处于妊娠期或哺乳期妇女；过敏体质及患有精神疾病等患者。活动组男11例，女19例，平均年龄为(45.0±10.3)岁；稳定组男10例，女20例，平均年龄为(43.7±10.6)岁；正常组男10例，女20例，平均年龄为(44.6±10.9)岁。三组在年龄、性别方面比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。

1.2 仪器与试剂 人IL-13 ELISA试剂盒、人IL-17A ELISA试剂盒、淋巴细胞分离液(爱必信生物科技有限公司)，RPMI-1640培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)，重组人白细胞介素13(rhIL-13)(美国R&D公司)，抗人CD3和抗人CD28(美国BioLegend公司)，Easy Sep人CD4+T 细胞磁珠分选盒(加拿大STEMCELL Technologies公司)，磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffer saline，PBS) 、Trizol试剂[宝生物工程(大连)有限公司]。使用的仪器包括全自动定量酶标仪、台式离心机、全自动荧光定量PCR扩增仪。

1.3 研究方法

1.3.1 血清IL-13检测：所有研究对象取晨起空腹全血3 ml,3000 r/min离心10 min分离血清，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RA患者及正常组血清IL-13表达水平，并将RA患者与疾病活动度评分、红细胞沉降率(ESR)及C反应蛋白(CRP)进行相关性分析。……