苏 游，刘新月，刘巧梅

(广西国际壮医医院妇科,广西 南宁530201)

卵巢癌是临床上一种较为常见的妇科肿瘤疾病，相关统计显示，全球卵巢癌发病率居妇科恶性肿瘤第三位，且每年病死人数高达十多万，病死率持续上升[1]。超过90%的患者确诊时已处于卵巢癌Ⅲ-Ⅳ期，此时临床治疗多以手术切除和放化疗为主。紫杉醇作为一线化疗药物在卵巢癌治疗中应用广泛，然而大部分患者病情复发会对紫杉醇产生耐药，导致疗效不佳，严重危险患者生存[2-3]。因此，逆转紫杉醇耐药，深入探讨卵巢癌的调控机制，对靶向治疗具有重要意义。自噬基因Beclin1属于肌动蛋白类Bcl-2相关蛋白，位于人染色体17q21[4-5]。Beclin1基因在自噬活性及相关信号通路中，参与调控了多种肿瘤发生发展过程，其过表达可诱导细胞自噬、凋亡，抑制肿瘤的增殖、侵袭和迁移[5]。有研究[6-7]证实，Beclin1可与相关分子形成不同螯合物，包括Beclin1-UVRAG-PI3K、Beclin1-UVRAG-Rubicon-PI3K、Beclin1-Atg14-PI3K，说明Beclin1基因介导的肿瘤细胞自噬与EGFR/PI3K/AKT信号通路密切相关。因此，本文将探究自噬基因Beclin1过表达在卵巢癌SKOV3细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响，并分析其与紫杉醇耐药的关系。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TXA购自中科院上海细胞库。细胞于含10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基中(100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素)完全培养，并在37 ℃、5% CO2恒温培养箱条件下培养。胎牛血清、RPMI 1640培养基均购自Gibco公司。

1.2 细胞转染及分组 取SKOV3/TXA(5×105)接种于6孔培养板，待细胞生长覆盖孔底板面积的80%时，根据说明书操作步骤，通过Lipofectamine 2000(美国，Invivogen)将pcDNA3.1-Beclin1及pcDNA3.1转染至SKOV3/TXA细胞中，转染24 h 后将细胞转移至RPMI 1640 培养基中继续培养48 h，获得稳定表达的细胞株。……