高媛惠，马林峰，霍乃蕊

（1.太原海关技术中心，山西太原 030024；2.山西农业大学动物医学学院，山西太谷 030801）

细胞融合是指2 个或2 个以上的亲代细胞通过细胞膜融合，细胞质混合，甚至细胞核融合后形成杂交细胞的现象，形成的子代细胞将兼具亲本细胞的表型[1]。细胞融合可自然发生[2]，也可在体外通过促融剂来制备融合子。作为细胞生物学的一项核心技术[3]，细胞融合技术在科学研究、动植物育种[4]、单克隆抗体[5-7]、疫苗、药物[8]制备和研发中广泛应用。菌体细胞融合之前需要制备成没有细胞壁的原生质体，原生质体融合时，2 个亲株整套基因发生接触、交换和组合，得到多种类型的重组子，从而可获得性能优良的菌株[9]。原生质体融合技术是21 世纪初发展起来的基于全基因组的定向微生物菌种改良技术[10]，广泛用于食品添加剂[11]、药物[12]、食用菌[13]等的生产及生物治污。

本研究采用单因素试验考察菌龄、溶菌酶浓度、酶解温度和时间对原生质体形成率和再生率的影响，并以原生质体形成率为指标，通过正交试验优化原生质体制备工艺，旨在优化嗜酸乳杆菌和地衣芽孢杆菌的原生质体制备工艺来获得融合子，为产芽孢乳酸菌的育种和改良提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 材料

嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）BL20386 无毒菌株从整肠生胶囊（东北制药集团沈阳第一制药有限公司）中分离纯化。

1.2 试剂与仪器

柠檬酸三铵（天津市化学试剂六厂）、顺丁烯二酸（北京奥博星生物技术有限责任公司）、吐温-80（天津市风船化学试剂科技有限公司）。……