李 旸，王祎哲，孙小雨，贾旭颖，周文礼，高金伟，邵 蓬，窦 勇

(天津农学院水产学院/天津市水产生态与养殖重点试验室，天津 300384)

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 微藻 纤细裸藻(Euglenagracilis)由天津市水产生态及养殖重点实验室提供。基础培养基为去离子水配制的经121.3 ℃条件下灭菌20 min的AF-6培养基。培养温度为(25±1) ℃，光照强度为55 μmol/(m2·s)，光暗比12 L∶12 D。每天至少3次定时摇动藻液，防止其贴壁或沉淀。

1.1.2 试验试剂 超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测试剂盒来源于北京索莱宝科技有限公司，其余化学试剂均为国产分析纯试剂。

1.2 试验方法

1.2.1 固定化藻球的制备 微藻培养至对数期(细胞密度为1.8×106cell/mL)，离心浓缩，弃去上清液，取一定体积的微藻细胞浓缩液混合于4%海藻酸钠溶液中，用10 mL注射器在距离预冷的2% CaCl2溶液水面20 cm处以60滴/min左右的速度滴入，形成小球状。滴入的藻液进入CaCl2溶液后形成藻珠后，静置1 h，灭菌去离子水洗涤多次后备用，培养12 d，培养条件同1.1.1。

1.2.2 小球藻胶球解固定 从培养液中取出一定数量的藻珠，滴加一定量的3%的柠檬酸钠(C6H5Na3O7)溶液，静置至藻珠完全溶解。

1.3 测定方法

1.3.1 细胞密度测定 每2 d取样，采用血球计数板法[20]对藻细胞密度进行测定。根据公式(μ=(lnN-lnN0)/(t-t0) 计算相对生长速率，其中，μ为相对生长速率,N、N0分别为t时刻的藻密度、t0(初始)时刻藻密度。

1.3.2 色素含量测定 每2 d取样，用乙醇法[21]对藻类进行测定的方式测定叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素含量。样品离心弃上清，加入95%乙醇溶液于4 ℃冷藏24 h，经离心后取上清，测定各波长下吸光值。

Ca(mg/L)=13.95A665- 6.88A649

(1)

Cb(mg/L)=24.96A649- 7.32A665

(2)

Cc(mg/L)=(1000A470- 2.05Ca-114.8Cb)/245

(3)

式中：Ca、Cb、Cc分别为叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的浓度。……