黄晓燕 王英 廉姜芳

遗传性长QT 综合征（hereditary long QT syndrome，hLQTs）是因编码心肌离子通道蛋白基因突变导致心肌细胞膜离子通道功能障碍的一组临床综合征，常于青少年发病，是青少年猝死的主要原因。其中Ⅱ型长QT 综合征（long QT syndrome 2，LQT2）的发生与快激活延迟整流钾电流（rapidly activating component of delayed rectifier potassium current，IKr）的减少有关，这是由于编码IKr通道α 亚单位的人类ether-a-go-go 相关基因（human ether-a-go-gorelated gene，hERG）的突变引起[1]。迄今为止，已发现了500 多个hERG 基因突变位点，其中大多为错义突变[2-3]，G572R 突变是其中之一。已知G572R 突变导致其编码的蛋白质合成和转运障碍，突变蛋白滞留于内质网，无法转运至细胞膜上形成有功能的离子通道，导致编码的IKr电流减少和心室复极延迟。目前对LQT2 患者缺乏特异性诊断及有效治疗方法。本研究探讨药物E-4031 对WT/G572R-hERG杂合型通道功能的影响，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 主要试剂 DMEM 培养基购自美国Thermo scientific 公司；转染试剂（LipofectaminTM2000）购自美国Invitrogen 公司；兔抗hERG 多克隆抗体购自以色列Alomone 公司；E-4031 购自德国Calbiochem 公司；膜片钳系统及分析软件为美国Axon 公司产品。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养、转染 HEK293T 细胞常规用含10%胎牛血清DMEM 培养基培养，根据转染试剂提供的实验步骤，将2.5 μg pcDNA3-WT-hERG 质粒和2.5 μg pcDNA3-G572R-hERG 质粒，瞬时转染HEK293T 细胞，构建WT/G572R-hERG 细胞株。同时共转染0.8 μg绿色荧光蛋白以监测转染效率。

1.2.2 药物干预 构建WT/G572R-hERG 细胞株后，将其分为两组，观察组加入E-4031 孵育24h，作用浓度为5 μmol/L。对照组用含10%胎牛血清DMEM 培养基常规培养24 h。

1.2.3 hERG 通道蛋白表达的检测 采用Western blot 法检测两组hERG 通道蛋白的表达。收集两组细胞，加入预冷蛋白裂解液。取裂解上清液加样，经7.5%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜至聚偏二氟乙烯膜。……