（胶州市动物疫病预防与控制中心，山东胶州 266300）

貉 细 小 病 毒（raccoon dog parvovirus，RDPV）属细小病毒科细小病毒属，为无囊膜单链DNA 病毒[1]。其核衣壳由VP1、VP2 和VP3 蛋白组成[2]。一般认为，RDPV 最早由犬细小病毒（CPV）跨宿主感染貉而产生，是CPV 的同属异种病毒[3]。1984 年，我国黑龙江省首次报道发生貉细小病毒性肠炎。1988 年，夏咸柱等[4]从我国不同地区肠炎病貉中分离出3 株RDPV，从而证实我国存在RDPV。2008—2018 年，我国黑龙江、辽宁、山东等省份相继有分离到RDPV 的报道[5-9]。

RDPV 引起的貉细小病毒性肠炎发病率和死亡率较高，严重危害貉养殖业。在幼貉群中，RDPV常呈地方性流行，主要引起发病貉腹泻，导致胃肠炎性变化，剖检可见肠道出血、胃肠黏膜脱落。本研究从山东省某貉养殖场分离到1 株RDPV。为了解RDPV 特性及其致病特点，对其VP2基因进行了序列分析、理化特性研究，以及貉人工感染试验，以期为RDPV 研究及流行病学调查提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 病料处理

将采自山东省某貉养殖场腹泻貉粪便，按照1:5的体积比加入适量生理盐水，研磨后10 000 r/min 离心15 min；取上清加入等体积氯仿，室温作用30 min后，12 000 r/min 离心15 min；弃去氯仿，将病毒液经0.22 μm 过滤除菌，-15 ℃以下保存备用。

1.2 病毒分离

按照同步接毒方法，将过滤的病毒液接种到F81 细胞，接种比例为5%；接种后次日换维持液，每日观察细胞病变情况，若无细胞病变（CPE）则将细胞培养物冻融后按相同方法继续传代，待CPE 达80%以上时收获病毒液。

1.3 病毒组织细胞半数感染量（TCID50）测定

取CPE 病变稳定的第2 代病毒液依次进行10-3～10-8稀释，分别接种于F81 细胞96 孔细胞培养板中，每个稀释度做8 个重复，0.1 mL/孔，每孔补加0.1 mL 的培养液；……