1 型、2 型牛病毒性腹泻病毒通用RT-PCR检测方法的建立与应用
2021-02-05曾维欢肖望成康京丽黄保续吴发兴代飞燕
曾维欢,李 蓉,肖望成,康京丽,黄保续,吴发兴,代飞燕
(1.云南农业大学,云南昆明 650201;2.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032)
牛病毒性腹泻黏膜病(bovine viral diarrheamucosal disease,BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的母牛繁殖障碍,各年龄牛呼吸、消化系统损伤的免疫抑制性疾病[1]。该病被世界动物卫生组织(OIE)列为须通报动物疫病。1946 年,该病首次在美国被发现,之后其在其他各国家相继暴发并全球流行[2]。OIE 官方网站数据显示,截至2020 年上半年,BVD 在各大洲仍处于流行阶段。1980 年,我国首次从胎牛血清中分离出BVDV(长春184 株)[3]。OIE 公布的调查数据显示,该病目前在我国境内呈地方性流行。BVDV 除感染各年龄阶段牛外,还可感染猪[4]及其他反刍动物[5]。BVDV 能造成机体免疫机能下降,易继发与其他病毒或细菌混合感染,在没有采取综合防控措施的牛场,有60%的牛会感染BVDV[6]。在全世界,每年死于BVD 的牛不少于500 万头[7]。该病也危害着我国养牛业的发展。
BVDV 为黄病毒科瘟病毒属成员,是单股正链RNA 病毒,基因组长12.3~12.5 kb。其整个基因组由5'-UTR,C、Erns、E1、E2结构蛋白基因,Npro、p7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5、NS5B非结构蛋白基因和3'-UTR 组成。其中,5'-UTR 含360 个核苷酸,具有稳定的茎环结构(Ia 发夹),参与病毒RNA 的翻译起始和复制。BVDV 不同毒株5'-UTR 基因序列高度保守,根据其基因序列差异分为1 型、2 型BVDV。2004 年,Schirrmeier 等[8]在德国一家实验室首次从巴西进口的一批胎牛血清(FBS)中检测到霍比样病毒分离物D32/00。该病毒与1 型、2 型BVDV 亲缘关系较近,但不在同一分支,将其归类为3 型BVDV,又称HoBi like pestivirus。现已发现1 型BVDV 至少有22个基因亚型(1a—1v),2 型BVDV 有4 个基因亚型(2a—2d)[9]。在我国流行的BVDV 毒株有1a、1b、1c、1d、1m、1o、1p、1q、1u、2a 以及2b 型[10]。……
