章晶晶 钟 鹏 孔 彬 黄 鹤

外源基因转入真核细胞即通常所说的细胞转染技术，是研究基因表达调控及基因治疗的有效技术之一，目前可通过磷酸钙沉淀法、脂质体介导法、电穿孔法、显微注射法及病毒感染等实现[1～5]。而大鼠心肌细胞系 H9C2能稳定传代，有着骨骼肌的很多特性，是一种常用的心肌细胞模型[6]。随着细胞转染技术的广泛应用，找到高效、无毒转染 H9C2 细胞的方法将为心血管疾病治疗提供更多思路。其中病毒感染是一种应用广泛的策略，其具有操作简便、宿主范围广且可以高效感染细胞等特点。而腺相关病毒(AAV)是迄今为止最安全、最良好、最有前景的基因治疗工具，AAV-DJ病毒是近年来新发现的一种由AAV2型、8型、9型组成的嵌合体，是通过改组8种不同的野生型病毒而产生的。已有报道显示，AAV-DJ病毒对多种组织和细胞的感染效率远高于原生AAV血清型[7]。因其具有广泛的侵噬性，可以高效地感染多种细胞，而被广泛地用于基因转导。然而，AAV-DJ病毒对心脏感染的研究却少有报道，到目前为止，仅有1例研究报道AAV-DJ病毒对心肌梗死后小鼠的心脏具有感染效能[8]。所以，笔者想探究AAV-DJ病毒对心肌细胞的感染能力，从而寻找出一种可以安全高效地感染心脏的病毒载体。

材料与方法

1.材料：质粒载体包括pAAV-MCS、pcDNA3.1-EGFP、pHelper、pAAV-DJ、pAAV-RC9均购自武汉淼灵生物科技有限公司。EcoRⅠ和XbaⅠ限制酶购自美国NEB公司。T4 DNA连接酶和凝胶纯化试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。DH5α感受态细胞获自上海威迪生物技术有限公司。……