杨 鹏，何 洋，李 成，王黎洲，蒋天鹏，许国辉，周 石

肝细胞肝癌（HCC）是发生在肝内胆管或肝细胞内恶性肿瘤主要类型，其治疗方案包括手术切除、介入治疗、放化疗、生物治疗、靶向药物治疗等［1］。目前很多研究表明诸多癌症发生和发展与微小核糖核酸（microRNA，miRNA，miR）在体内表达增多有一定联系［2］，甚至限定某种特定 miR 表达增多，可能与某种特定癌症有着单一对象联系［3］。其中不同miRNA又大致分为两种，一种起类癌基因作用，另一类起抑癌基因作用［4］。有研究发现 miR-7 在肝癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌中表达均有所下降，因此起到抑癌基因作用［5-6］，但具体作用机制未完全明确。表皮细胞生长因子受体（EGFR）可在大多数肿瘤中过度表达和/或突变，与肿瘤细胞增殖、侵袭和转移、血管生成密切相关［7］。近年临床研究证实EGFR存在于许多实体瘤体中，其表达与miR-7 表达有一定关联［8］。因此，本研究探讨 miR-7 是否通过靶向调控肝癌细胞中EGFR，进而对肝癌细胞增殖和侵袭转移产生影响，为其治疗新策略提供潜在靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

将HepG2 人肝癌细胞株（美国菌种保藏中心ATCC）置于10%胎牛血清（FBS）并加入100 mg/mL链霉素、100 U/mL 青霉素的Roswell Park 纪念研究所（RPMI）培养基，在 37℃、5%CO2培养箱中培养，观察细胞生长为80%时进行细胞传代。

1.2 细胞转染和荧光定量聚合酶链反应检测

在线数据库（Http：//www.xnicroma.org/microma/home.do）查找相应资料，确定EGFR 是否为miR-7目的基因；从Ensembl 网站查找EGFR 基因序列，再将找到的条件合适的基因序列复制到Primer designing tool 网站设计合适引物，方便为下一步聚合酶链反应（PCR）实验做准备。将HepG2 人肝癌细胞分为miR-7 上调组和miR-7 下调组，其中上调组又分为激动剂组（mimic）、激动剂阴性对照组（mimic negative）、空白对照组（mock）；……