何秀 张碧清 刘春花

(1.郴州市第一人民医院儿科，湖南 郴州 423000;2.郴州市第一人民医院儿童医院儿童呼吸科，湖南 郴州 423000)

支气管哮喘属于慢性气道炎症类疾病之一，支气管上皮细胞损伤在支气管哮喘发生过程中发挥重要作用[1-2]。既往研究显示支气管上皮细胞释放出炎性因子可引发机体炎症反应从而造成损伤[3]。目前支气管哮喘发病机制尚未阐明，因而从支气管上皮细胞角度出发探究支气管哮喘发病机制具有重要意义。长链非编码RNA母系表达基因3(Long non-coding RNA MEG3，LncRNA MEG3)表达水平降低可增强脂多糖(lipopolysacharide，LPS)诱导的肺细胞损伤[4]。但MEG3在支气管哮喘发生过程中的调控机制尚未阐明。研究表明LPS作为一种促炎因子可用于炎症性疾病的体外研究[5-7]。本研究分析LPS对支气管上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响，探讨干扰MEG3表达或MEG3过表达对LPS诱导的支气管上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响，为支气管哮喘发病机制奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 人支气管上皮细胞16HBE购自美国ATCC细胞库；杜氏改良培养基(DMEM)、胎牛血清均购自美国HyClone公司；膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)细胞凋亡试剂盒购自美国BD公司；白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)与白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒购自南京建成生物工程有限公司；脂多糖(LPS)与甲基噻唑基四唑(MTT)购自美国Sigma公司；Lipofectamine2000、Triol试剂盒、反转录试剂盒与实时荧光定量检测试剂盒均购自美国Invitrogen公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量检测试剂盒购自湖南艾佳生物科技股份有限公司；……