王剑文 孙丹 冯雁明

(1.武汉市金银潭医院呼吸结核科,湖北 武汉 430062；2.武汉市金银潭医院血管介入科,湖北 武汉 430062；3.中国人民解放军中部战区总医院,湖北 武汉 430070)

肺癌是世界上癌症死亡的首要原凶。肺癌的治疗主要根据癌症的亚型和分期来决定，近年来，针对癌症亚型的个性化靶向治疗也越来越多的应用于肺癌的治疗[1-3]。lncRNA(long non-coding RNA)可调控非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡，参与肿瘤的发生发展[4-5]。有研究表明，lncRNALINC00987在肺腺癌中明显低表达，与患者的总生存期降低有关[6-7]，但其具体作用机制尚不清楚。本研究通过生物信息学预测，发现LINC00987与miR-375存在结合位点。miR-375在NSCLC细胞中高表达，其高表达可增强NSCLC细胞的侵袭、迁移能力[8]。LINC00987和miR-375在肺癌中是否存在调控关系还不清楚。本研究以肺癌细胞A549为主要研究对象，假设LINC00987通过靶向miR-375调控A549细胞增殖、侵袭和迁移，并对此假设进行验证，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 人肺癌细胞株A549、HCC827、H1299细胞购自ATCC，正常肺泡上皮细胞HPAEPIC购自北纳生物；RPMI-1640培养基和胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自美国Gibco公司，牛血清白蛋白(Bovine Serun Albumin,BSA)和胰蛋白酶购自美国Sigma-Aldrich公司；Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；Transwell板购自美国Corning公司；引物、LINC00987过表达载体(pcDNA-LINC00987)、LINC00987小干扰RNA(si-LINC00987)、miR-375 mimics(miR-375)、miR-375 inhibitors(anti-miR-375)、阴性对照(pcDNA-control、si-control、miR-control和anti-miR-control)、LINC00987野生型(WT)和突变型(MUT)双荧光素酶报告系统载体购自上海吉玛制药有限公司；Lipofectamine 2000转染试剂、Total RNA提取试剂盒、real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒(RT-PCR)购自宝生物工程(大连)有限公司；双荧光素酶报告系统(Dual-Luciferase Reporter Assay System)购自美国Promega公司；光学显微镜、全自动酶标仪、发光仪及Real-time PCR仪购自美国Bio-Rad公司。……