安 鹏,郑荣儿,吴佳敏,许益鹏,俞晓平

(中国计量大学 生命科学学院 浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室,浙江 杭州 30018)

自1993年科学家首次在秀丽线虫样本中发现microRNA(miRNA)以来,至今已在多种动植物和病毒中发现了数千种miRNA,而在人体内也已发现700多种miRNA[1-2]。miRNA是一类长约21～25 nt的非编码RNA,对控制基因表达与调控至关重要[3]。研究发现,miRNA几乎与所有的细胞生命活动有关,能通过抑制基因表达或降解mRNA来调控细胞发育、凋亡和分化等过程[1,4-5]。在人体不同病理条件下,相关miRNA表达量会发生特定的变化,使得miRNA成为疾病诊断和预后的重要临床标志物之一,目前已被广泛应用于肿瘤、血液疾病和心血管疾病等相关研究中[6-8]。miRNA的检测方法很多,包括原位杂交、微阵列、流式细胞、定量实时PCR等,其优缺点不一,然而miRNA在人的血液中含量甚微,获得高浓度、高质量的miRNA是进行研究的第一步,也是关键的一步[9-10]。

传统的miRNA提取方法无法满足研究的要求,现在常用的miRNA提取方法有芯片法、旋转柱法和磁珠法等[11-13]。磁珠法是近年来新兴的一种核酸提取方法,具有高效性、特异性等优点,被广泛应用于miRNA提取的研究。目前,市面上有很多不同类型用于核酸提取的纳米磁珠,这些磁珠的大小、修饰官能团和生产工艺都有所不同,导致它们核酸提取性能也有很大的差异[14]。除磁珠本身因素的影响外,miRNA提取过程中磁珠用量、裂解液pH等对提取效果也有很大的影响,具体的影响情况又会因磁珠的不同而不同[15]。因此,本研究主要以人标准血清为样本,以Promega磁珠法血清miRNA提取试剂盒为对照,比较研究了三种不同品牌的磁珠在不同磁珠用量和不同裂解液pH条件下的miRNA提取性能。……