余 庭,蒋 晗,杨宇婷,林如梦,吴江春,李奕娴,朱 诚

(中国计量大学 生命科学学院 浙江省海洋食品品质及危害物控制技术重点实验室,浙江 杭州 310018)

美人鱼发光杆菌(Photobacteriumdamselae)是一种嗜盐的革兰氏阴性菌,呈杆状或者球状,它分为美人鱼亚种(P.damselaesubsp.damselae)和杀鱼亚种(P.damselaesubsp.piscicida),两者的重要区别是美人鱼亚种含有特异基因ureC。美人鱼发光杆菌分布范围广,致病性强,是养殖鱼类的重要致病菌[1-2]。此外,它还可以通过食物链或伤口感染等途径感染人类或哺乳动物,引起败血症,对公众健康造成重大危害[3-4]。近年来,国内外养殖鱼类感染美人鱼发光杆菌的病例逐渐增大,给鱼类养殖业造成巨大损失[5-6]。因此,建立一种快速、准确、有效的检测美人鱼发光杆菌的方法,对海水养殖业和食品安全管理具有重要意义。

目前,对美人鱼发光杆菌的检测,主要是采用传统的细菌分离鉴定、生理生化鉴定和基于PCR技术的分子检测[4,6-7]等方法。然而这些方法耗时长、操作复杂,且需要专业的仪器设备和技术人员。重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)是一种高效的恒温核酸扩增技术,可在常温条件下实现核酸指数扩增,具有反应灵敏、高效、性价比高的特点,一般在30 min以内即能获得可检出水平的扩增产物[7-10]。通过与荧光基团标记,RPA扩增产物可与侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合,实现扩增产物的可视化检测。RPA技术自2006年发明以来发展迅速,在动物疫病诊断、微生物及其耐药性检测等领域均得到了很好的应用。如RPA技术已成功应用到日本血吸虫、猪嵴病毒、布鲁氏菌和磺胺耐药基因等的检测中,并结合LFD,其检测结果在2～5 min内直接可视[11-14]。……