张光磊，梁云坤，金丽兰

吉林省敦化市农业农村局畜牧站，吉林敦化 133700

胰岛移植被认为是治疗Ⅰ型糖尿病的最理想的方法。猪胰岛细胞和人胰岛细胞的氨基酸序列仅相差一个，能够在人体内发挥调节血糖水平的正常功能。所以，猪胰岛已经成为治疗人Ⅰ型糖尿病的最理想供体。关于猪胰岛分离纯化方面已经积累了大量研究资料。结果表明，猪胰腺结缔组织发达，内分泌与外分泌连接紧密；胰岛周围缺乏被摸保护，容易破碎。此外，猪的年龄、品系和体外缺血时间等同样是影响胰岛产量和活力的客观因素。此外，朱海涛等认为猪胰岛细胞一般来源于胎猪、新生猪或成年猪，但是何时期的猪胰岛细胞更适合于人类进行异种移植，现仍存在争议。因此，本试验为进一步探讨完善并建立猪胰岛细胞分离纯化方法提供参考数据，以出生1日龄、50日龄、100日龄、150日龄猪为试验动物，采用胶原酶注射法、DTZ染色法、histopaque法等进行猪胰岛形态学观察及胰岛分离纯化，并采用葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测1日龄和150日龄猪胰岛体外功能。

1 材料与方法

1.1 材料

本试验选用出生1日龄、50日龄、100日龄及150日龄健康长白猪的胰腺组织各5例。

1.2 试剂与仪器

试剂：胶原酶Ⅴ、DTZ（双硫腙）、Histopaque-1077、Hanks、台盼蓝均购自于Sigma公司；胎牛血清、RPMI-1640购于Gibco公司；ELISA检测试剂盒购于RD公司。主要仪器设备：实体显微镜（OLYMPUS）、卧式圆形压力蒸汽灭菌器（TOMY KOGYO）、二氧化碳培养箱（Sanyo MCO-18AIC）、电热恒温鼓风干燥箱、电子天平，离心机，超级洁净工作台等。

1.3 方法

1.3.1 猪胰腺的取材