阮 谦，刘应华，赵 谦，王 蕾，尹革芬*

(1.云南农业大学动物医学院，云南 昆明 6502012；2.楚雄州动物疫病预防控制中心，云南 楚雄 675000)

牛流行热(Bovine Ephemeral Fever，BEF)是由牛流行热病毒(Bovine Ephemeral Fever Virus，BEFV)引起牛机体内部温度突然升高、呼吸困难、肠胃功能异常、全身无力、不灵活和行动异常的一种传染疾病。该病传播速度极快，很多地方的牛群都难避免，并且流行具有一定的周期性。BEF可导致奶牛产奶量下降，妊娠奶牛出现流产，会给养牛业造成巨大经济损失[1-3]。该病大多发生在夏、秋蚊子活跃期，雨季或昼夜温差大容易引起流行[4]。健康牛被蚊虫叮咬后，如果该蚊虫叮咬过病牛，即会感染。目前，BEFV被归入弹状病毒科，病毒外型为子弹型，核酸为单股负链RNA，有5种结构蛋白，对脂类物质敏感[5-6]。

据近年来的相关报道，BEF对牛群的危害日趋严重，所以需要建立一种实用、敏感且快速便捷的分子检测方法，以便做到早确诊、早隔离、早治疗，最大限度地降低BEF带来的损失[7]。为了满足现今牛场对BEF的检测要求，本研究针对BEFV的G基因设计一对特异性引物，建立荧光定量PCR检测方法，为临床上BEF的诊断提供支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样本采集

样本均采自云南省大理州两个规模化牛场，为疑似BEFV感染的20份新鲜血液样本，阳性对照为BEF疫苗。

1.1.2 主要仪器

移液器(KA0052521，DRAGON公司)、超净工作台(SW-CJ-1FD，苏州净化设备有限公司)、高速冷冻离心机(75005440，Thermo Fisher Scientific公司)、凝胶成像系统(Tanon-1600，天能科技有限公司)、电泳仪(DYY-7C，北京六一仪器厂)、荧光定量PCR仪(580BR 12007，BIO-RAD公司)、恒温水浴锅(HWS12，上海一恒科学仪器有限公司)。

1.1.3 主要试剂