吕秀芳，周晓倩

（1南通大学医学院病理学系，江苏 226001；2贵阳市第一人民医院消化内科）

胆管癌（cholangiocarcinoma，CCA）是起源于胆管上皮细胞、具有高度侵袭性的恶性肿瘤。胆管癌好发于东南亚地区，以我国和泰国为主，西方国家胆管癌发病率也呈逐年上升的趋势[1-2]。在众多发病危险因素中，多种原因引起的慢性胆道阻塞是主要诱因之一[3]。胆道阻塞导致胆汁淤积，肝内胆汁酸和其他有毒化合物累积，触发细胞和分子复杂的级联反应，引起组织纤维化，最终形成终末阶段肝硬化，导致器官衰竭或肿瘤发生[4-5]。GREM1基因最早于1998年在非洲爪蟾中发现[6]，其编码的分泌型糖基化蛋白可以与骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）结合，发挥拮抗剂作用。GREM1参与肝纤维化[7-8]、肾纤维化[9-10]和肺纤维化[11]等病理过程。本文研究GREM1在胆管结扎诱导的大鼠肝纤维化组织、人胆管癌组织中的表达，并探讨其在胆汁淤积性肝纤维化和胆管癌中的表达意义。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器 抗GREM1抗体（Sigma，美国），免疫组化试剂盒（Dako，丹麦），Trizol（Sigma，美国），逆转录试剂盒及PCR扩增试剂盒（Takara，日本），人胆管癌组织芯片（Abcam公司，英国）。石蜡切片机（Lieca，德国），DM4000正置光学显微镜（Lieca，德国），实时定量PCR仪（Bio-Rad，美国）。

1.2 动物实验方法

1.2.1 实验动物：选择体重220±250 g健康雄性SD大鼠，清洁级，12 h昼夜节律分笼饲养，自由饮食水。所有程序符合《中华人民共和国实验动物管理条例》及伦理要求。大鼠随机分为假手术组和胆管结扎（bile duct ligation，BDL）手术组，每组各10只。术后28天在2%异氟烷麻醉下放血处死大鼠，取肝脏分成约1 cm3大小，取2块肝组织浸于10%福尔马林溶液，其余肝组织置于-80℃冰箱储存备用。……