吴小梅，贾汝汝，张 蕊，陈 蕾，朱 俐

（南通大学特种医学研究院，江苏226019）

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）病因非常复杂，发生机制至今尚不完全清楚。研究发现，PD患者脑黑质内铁积聚异常明显，铁含量与PD病情的严重程度正相关[1]；铁摄入增多与PD发病危险性增加正相关，食用富铁食物人群罹患PD的危险性增加1.7倍[2]。PD患者黑质铁异常积聚除了与摄入过多有关，也可能与铁清除障碍相关。研究表明，PD发生与中枢神经系统炎症有关，小胶质细胞活化参与其中[3]。CX3CL1/CX3CR1在调控细胞趋化和粘附过程中发挥重要作用。CX3CL1主要由神经元产生，与受体CX3CR1结合后通过稳定小胶质细胞的状态，从而抑制中枢神经系统炎症反应，对神经元产生一定的保护作用[4-5]。本研究观察在PD发生过程中CX3CL1对小胶质细胞铁吸收是否有影响，旨在进一步阐明PD发生机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 将MES23.5和BV2细胞接种于10 cm培养皿、6孔或96孔培养板中，应用含10%胎牛血清的高糖DMEM（Life Technologies）培养，在细胞融合度达到80%时开始实验。MES23.5细胞分别用终浓度为75 μmol/L 6-羟基多巴胺（6-hydroxy dopamine，6-OHDA）、5 μg/mL 柠檬酸铁铵（ferric ammonium citrate，FAC）处理 12 h，然后继续培养 24 h，收集培养基备用。BV2细胞预先用CX3CL1或MES23.5细胞培养基处理24 h，或者预先用慢病毒感染72 h后再行处理，然后观察铁吸收的变化。

1.2 酶联免疫吸附试验 收集MES23.5细胞培养基，采用特异性ELISA试剂盒（Abcam公司）检测CX3CL1含量，操作步骤参照说明书。实验独立重复3次，检测结果表示为正常对照组含量的倍数。

1.3 铁吸收实验 对CX3CL1或MES23.5细胞培养基处理24 h的BV2细胞以及慢病毒感染72 h后再行处理的BV2细胞，用0.125 μmol/L钙黄绿素（Calcein-AM）于37°C孵育10 min，HEPES洗3遍去除多余Calcein-AM指示剂。……