吴慧

（1.山东卫康医学检验有限公司，淄博市精准基因检测关键技术重点实验室，山东 淄博 255000；2.山东省遗传性疾病基因检测技术应用示范中心，山东 济南 250000）

0 引言

目前，提取高质量DNA的方法较多，但没有一种是被国际认可的高质量提取方法[1-2]。本研究以盆栽陕西商洛一年生紫花丹参的叶片为研究对象，对比分析了四种高质量丹参DNA提取方法的效果，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2019年6月至2019年9月，针对丹参DNA提取方法展开了相应研究，选取盆栽陕西商洛一年生紫花丹参的叶片为研究材料。

试剂：（1）SDS缓冲液：Tris-HCl缓冲液、NaCI各有100mmol/L（PH值为8.0），EDTA有50mmol/L（PH值为8.0），浓度为2%的SDS（g/100mL），常规灭菌后，备用。（2）CTAB缓冲液：Tris-HCl缓冲液有100mmol/L（PH值为8.0），NaCI有4mmol/L，EDTA有20mmol/L（PH值为8.0），浓度为2%的CTAB（g/100mL）。（3）l×TE缓 冲 液：Tris-HCl缓冲液有10mmol/L（PH值为8.0），EDTA有1mmol/L（PH值为8.0）。

1.2 方法

SDS法1与SDS法2：取适量新鲜丹参叶片，置入液氮低温中进行研磨，研磨完成后将叶片置入预冷离心管，将600μLSDS缓冲液预热（已预热至65℃），然后给予65℃的水浴（1-2h），水浴期间轻摇数次，充分混匀后加入等体积酚/氯仿，离心分离10min，提取上清液，加入预冷异丙醇，充分混匀后，在-30℃环境下静置10min，在4℃环境下离心3min。祛除上清液，使用浓度为70%的洗涤沉淀，连续2-3次后，自然干燥。SDS法1：加入50μLl×TE缓冲液在室温下溶解。SDS法2：加入3μLLRNAase在37℃环境下保温1h。然后加入等体积酚/氯仿，充分摇匀后，在4℃环境下离心10min。取上清液置入另一试管中，置入等体积氯仿，充分摇匀后，在4℃环境下离心10min。取上清液置入试管中，在试管中加入十分之一NaAc，给予2倍无水乙醇（冷），充分混匀后静置，在4℃环境下离心3min。祛除上清液，使用浓度为70%的洗涤沉淀，连续2-3次后，自然干燥，加入50μLl×TE缓冲液在室温下溶解[3-4]。……