谢晓丹

（江门市新会区第二人民医院，广东 江门 529100）

0 引言

布鲁氏菌是起源上世纪的人畜共患病症，布鲁氏菌通常具有羊、牛、猪、犬、绵羊以及沙林鼠等6个种类，其中牛、羊、猪、犬是主要的人畜共患菌种[1]。该病症会促使患者产生生殖器官炎症，造成不孕不育等病症，并且病菌的影响具有隐匿性，通常情况下无法迅速探知细菌的存在[2]。另外，该细菌无有效的药物进行清除，仅通过控制为主。因此早期的诊断对护理措施的开展有重要作用，检测通常可分为血清检测和分子生物监测，本次通过选用PCR技术，即分子生物学检测，为探究实时荧光定量PCR技术在细菌布鲁氏菌检验中的应用效果，选取疑似带有细菌布鲁氏菌患者进行研究，有以下报告。

1 资料与方法

1.1 一般资料

通过选取我院2019年1月至2020年1月的200例疑似带有细菌布鲁氏菌患者进行研究，通过采用实时荧光定量PCR技术减小检测，经过病理检测可知受检测患者包含86例布鲁氏菌患者，17例沙门菌患者，32例金色葡萄球菌患者，43例副溶血性孤菌患者以及22例轮状病毒患者。

1.2 检测方法

相关仪器及试剂：采用定量PCR扩增仪和其他离心机以及细菌基因组提取试剂盒。

方法：常规PCR测试方法，选用50μl，10×buffer5μl，同时引物各取0.25μl，Taq聚合酶0.8μl，dNTPs0.5μl，粗体DNA模板1μl。扩增条件：设定温度为94℃，对样本变性4min，随后以94℃变性45s后降低至58℃变性40s，后延伸至72℃变性60s，共计需要经32次循环过程，最后以72℃保温5min[3]。

实时荧光定量PCR检测：①样本提取：首先采用热裂解法提取10mL的细菌培养液置于试管，随后通过使用蒸馏水对其进行灭菌洗涤，共2次，最后选用1mL的蒸馏水悬浮，隔水煮沸10min，同时以8000r/min的离心操作进行10min离心，取上清制成DNA模板溶液。……