陈兴峰 张秀峰 石慧芳 何海武

(海南医学院第二附属医院呼吸内科，海口 570311)

气道、血管和胃肠道平滑肌细胞可以诱导分泌大量生物活性分子，促进炎症反应和免疫调节[1-2]。其中气道平滑肌(airway smooth muscle,ASM)细胞合成并释放的细胞因子参与气道高反应性，在支气管哮喘发病过程中促进气道重塑，其分泌的主要炎症因子包括IL-1β、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/趋化因子配体2(CCL2)，它们均依赖于ASM细胞中丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路中p38丝裂原的激活，MAPK信号通路的传导参与支气管哮喘的过敏性损伤[3-4]。MK2和MK3属于MAPK活化蛋白激酶(MKs)，主要由p38 a/b MAPK激活[5-6]。虽然MK2和MK3具有相同的底物识别序列，在相同的细胞应激和炎症刺激时可被激活[7-9]，但MK2在体内的表达和活性却明显强于MK3[10]。MK2中富含脯氨酸的SH3结合结构域，可调节各种类型细胞的迁移，MK3不具有此功能[11]。本研究从支气管中分离出支气管平滑肌细胞，通过腺病毒感染后使MK2、MK3高表达，检测MK2、MK3过表达对细胞因子分泌的影响并进一步分析其作用机制，为支气管哮喘的治疗提供可靠的理论基础。

1 材料与方法

1.1材料 野生型MK2(MK2WT)、野生型MK3(MK2WT)腺病毒和腺病毒载体pAdTrack-CMV由上海中洪博元生物技术有限公司合成；M199培养液、胎牛血清、人表皮生长因子、人成纤维细胞生长因子和胰岛素购于赛默飞公司；庆大霉素、两性霉素B和PBS溶液购于北京鼎国技术有限公司；D-Hanks购于北京索莱宝有限公司；IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)细胞因子购于美国Upstate Biotechnology公司；SDS-PAGE细胞裂解液购于碧云天生物技术有限公司；……