喻青青 樊 旭 朱 敏 郗雪艳 杜伯雨

(湖北医药学院，十堰 442000)

肝癌的发病率不断增加，肿瘤干细胞(cancer stem cell，CSCs)理论为肝癌的治疗提供了新的思路[1]。CSCs有肿瘤样特征，能够维持其自我更新和分化的能力[2]。肝癌中也存在肝癌干细胞(liver cancer stem cells，LCSCs)[3]。因此，CSCs的特异性靶向治疗对根除肿瘤和预防肝癌发生具有重要意义。

目前从中草药中寻找天然抗肿瘤活性成分是抗癌药物研究的一个重要途径和研究热点[4]。重楼现有药理研究表明，重楼具有抗肿瘤活性作用[5]。本文应用重楼有效成分重楼皂苷Ⅰ，通过体外细胞实验，观察其对肝癌细胞Huh7和HepG2的抑制作用，初步探究其是否具有抑制肝癌干细胞的作用。

1 材料与方法

1.1材料 HepG2细胞 和Huh7细胞购自中国医学科研学院基础医学研究所。重楼皂苷Ⅰ(纯度98%)购自上海源叶生物科技有限公司。DMEM培养基、胎牛血清购自 Gibco公司。

1.2方法

1.2.1细胞及药物处理 人肝癌细胞Huh7和HepG2分别培养于含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养基，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。细胞融合为90%时进行传代培养，不同浓度重楼皂苷Ⅰ处理肝癌细胞Huh7和HepG2。处理方法如下：①重楼皂苷Ⅰ(3.12 、6.25、12.50 μmol/L)处理肝癌细胞Huh7；②重楼皂苷Ⅰ(6.25、12.50、25 μmol/L)处理肝癌细胞HepG2，处理时间为24 h。

1.2.2MTT法检测细胞活力 选取80%～90%生长密度且状态良好的对数生长期的肝癌细胞Huh7和HepG2制成1×104个/ml的细胞悬液，向96孔板中接种100 μl上述细胞悬液，对照孔用添加DMSO的培养液制成的细胞悬液，每个浓度接种6个孔。培养24 h后弃去培养液，实验组加入不同浓度重楼皂苷Ⅰ(1.56、3.12、6.25、12.50、25、50 μmol/L)继续培养24 h。移除培养液，向孔板中加入100 μl 0.5%MTT溶液，孵育4 h后弃上清，加入150 μl DMSO 振荡6 min，溶解结晶物后570 nm处检测吸光值，计算抑制率。……