国伟，杨军，任法新，梁平平

心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemic-reperfusion injury，MIRI)是心肌长时间缺血重新恢复血液灌注后出现的一种损伤，其特点是更为明显和严重的损害或功能障碍，包括心肌收缩功能障碍、冠状动脉血流和血管反应性的变化。目前关于心肌缺血再灌注损伤的发病机制尚不完全清楚，也无预防及治疗的有效药物[1-2]。因此，探讨MIRI的深层发病机制和临床研发靶向治疗药物具有重大意义。近年来，SHH(sonic hodgehog)信号通路对心血管系统疾病的影响越来越受到人们的重视，其为探索保护心肌细胞功能提供了新的作用靶点[3]。研究还发现，SHH信号通路参与了多种缺血动物模型中的血管再生，包括脑、角膜、骨骼肌缺血及肢体缺血模型等[4-5]。然而，SHH信号通路在心肌缺血再灌注损伤中的研究很少。基于此，现探讨SHH信号通路激活对微血管内皮细胞(CMECs)缺血再灌注损伤促进血管再生的潜在作用，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)实验动物： SD大鼠(雄性)，月龄1月，体质量100～150 g，购于山东大学实验动物中心，动物许可证号SCXK(鲁)2016-0016，标准饲养，日常光照，自然饮水。 (2)试剂：10% FBS 的DMEM 培养液购于美国Invitrogen公司，无L-谷氨酰胺DMEM培养基，胰蛋白酶，Cyclopamin购于美国Sigma-Alidrich公司，重组人SHH蛋白购于美国Cambridge公司，ELISA试剂盒购于武汉Antigene公司，Trizol试剂盒购于美国Invitrogen公司，SMA 400 UV0VIS购于上海Merinton公司，BCA蛋白检测试剂盒购于美国Rochford公司，TM型cDNA合成试剂盒购于美国Bio-Rad公司。(3)仪器：全自动酶标仪(日本Olympus公司，型号AU400)， Bio-Image(Bio-Rad)图像分析软件。

1.2 实验方法 2016年7月—2017年2月于青岛大学附属烟台毓璜顶医院进行实验。

1.2.1 大鼠原代……