罗海霞，孙远航，徐兆坤，冯婷婷，郝秀静，李 敏

（宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏 银川 750021）

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）可引起绵羊及山羊传染性胸膜肺炎（非典型性肺炎）[1]，表现为高热、喘气、咳嗽、贫血、渐进性消瘦、生长发育迟缓、胸膜炎及纤维性肺炎等临床症状[1-2]。该病分布广泛，给养羊业造成重大的经济损失。研究表明支原体能够黏附到绵羊肺脏细胞，并对宿主细胞造成极大危害[3-4]，但宿主细胞与MO 感染的关系仍不明确。

细胞自噬（Autophagy）是真核生物中维持细胞内环境稳态的一种降解途径[5]，可降解细胞内的衰老细胞器和长寿蛋白，也可降解侵入性病原体[6]。在细胞的生存、抗感染免疫等方面起着重要作用[7]。研究发现解脲支原体感染细胞可以诱导细胞自噬，并且可以利用宿主细胞膜隔室（Host cellular membrane compartments）逃避宿主细胞的自噬和免疫损伤[5-8]；肺炎支原体可通过黏附细胞诱导自噬炎性反应[9]。目前关于MO 能否引起细胞自噬尚无报道，基于此本研究检测MO 感染TC-1 细胞后自噬相关基因的转录及蛋白的表达水平、自噬流的形成及干扰自噬后MO 在细胞内的增殖情况，对MO 诱导TC-1 细胞的自噬进行初步探究，为进一步揭示MO 的感染机制提供研究思路，进而为治疗该病提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料支原体肉汤培养基购自Hope⁃bio 生物技术有限公司；TAE 缓冲液（10×）购自Com⁃Win Biotech 生物科技有限公司；RNAsimple Total RNA Kit 购自北京TIANGEN 有限公司；SYBR®Pre⁃mix ExTaqTMII 和PrimeScripTMMaster Mix 购 自TaKaRa公司；胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、DMEM 购自Hyclone 公司；全蛋白提取试剂盒购自江苏凯基生物公司；……