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猪塞尼卡病毒VP2 ELISA 抗体检测方法的建立及初步应用

2021-01-22周而璇延君芳

中国预防兽医学报 2020年11期
关键词:血清检测方法

周而璇,范 慧,延君芳,姜 平,白 娟

(南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室,江苏 南京 210095)

塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA),最早称为塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus SVV)。中文名有塞内卡病毒、塞内加病毒和塞尼卡病毒。SVA 属于小RNA 病毒科塞内卡病毒属成员,2002 年Hales 等首次发现于PER.C6(人胚胎视网膜细胞)细胞,并发现该病毒具有溶解人类肿瘤作用[1]。2008 年以来,加拿大和美国等西方国家先后报道该病毒感染引起的猪临床疾病,包括成年猪口腔和鼻腔溃疡、厌食、烂足、仔猪嗜睡、虚弱、发热和呕吐等[2-5]。该病毒感染主要影响育肥猪和新生仔猪,1日龄~4日龄仔猪发病率可达到70%,死亡率15%~30%;母猪发病率可达到70%~90%,但死亡率仅0.2%[6-8]。2015 年,我国广东省证实猪群存在该病,且SVVCH-01-2015 分离株与国外病毒株基因同源性为94.4%~97.1%[9]。此后,有学者相继报道我国多地出现该病。本实验室从山东省某临床发病猪群也分离获得该病毒[10]。

该病毒抗体检测方法主要有间接ELISA、竞争ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)和病毒中和试验等。ELISA 方法采用的包被抗原有VP1、VP2、VP3和3AB 蛋白等[10-13]。VP2-ELISA 方法的敏感性和特异性分别为94.2%和89.7%,优于VP1 和VP3 抗原ELISA 方法,与IFA 符合率为89%[12]。病毒中和试验的特异性和敏感性分别为99.6%和98.2%[13]。本研究采用大肠杆菌表达系统表达获得VP2 纯化重组蛋白,通过条件优化,建立了VP2 间接ELISA 抗体检测方法,并用于规模化猪场血清流行病学调查,表明2016 年~2019 年我国多个省份广泛存在该病毒感染,为我国该病防控提供了重要流行病学资料。

1 材料与方法

1.1 病毒与血清SVA SVV-CH-SD 株由本实验室分离和保存;……

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