刘文宇，祝 瑶，王长珍，杨 亲，栾 天，王凌利，刘思国，周学章，张万江*

（1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队，黑龙江 哈尔滨 150069；2.宁夏大学生命科学学院，宁夏 银川 750021）

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种引起人和动物感染的重要致病菌，能够引起皮肤、肺等局部感染以及败血症、脓毒症等全身性感染性疾病，严重可致死亡，威胁着人类和动物健康[1]。金黄色葡萄球菌能够产生多种与致病性相关的细胞毒素，主要包括γ-溶血素和杀白细胞素（Panton-valen⁃tine leukocidin，PVL）。其中，PVL 是穿孔毒素，能够引起人体内白细胞的细胞毒性变化[2]，可致白细胞溶解和组织坏死。PVL 参与金黄色葡萄球菌引起的原发性皮肤感染、坏死性肺炎、肌肉骨骼损伤[3]，可作为其引起的侵袭性疾病的流行病学调查指标，例如菌血症、骨骼肌肉疾病以及软组织感染等[4]。此外，研究还发现PVL 是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的主要毒力因子[5]。PVL 由LukSPV 和LukF-PV 这两个共转录基因组成，二者编码的相应多肽组装在一起构成具有活性的PVL 蛋白[3]。尽管目前研究表明PVL 在金黄色葡萄球菌致病性中发挥着重要作用，但该毒力因子具体的致病机理还不十分明确，本实验以金黄色葡萄球菌ATCC 49775株为研究对象，利用同源重组的方法构建PVL 基因敲除菌株，并对敲除菌株的稳定性和生长特性进行评价，为进一步阐明金黄色葡萄球菌PVL 的致病机理奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料金黄色葡萄球菌ATCC 49775株、RN4220 株、质粒pBT2、pLI50、pEC1 均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物细菌病研究团队保存；……