李 宁，李丽红，米文强，张雪霞，任风芝*，刘建芬

(1.华北制药集团新药研究开发有限责任公司 微生物药物国家工程研究中心河北省工业微生物药物代谢工程技术中心，河北 石家庄 050015；2.华北制药华坤河北生物技术有限公司，河北 石家庄 050000)

肝素钠是由不同分子量糖链的硫酸氨基葡聚糖的钠盐组成的混合物[1]，是目前抗凝血和抗血栓的首选药物[2]，还具有抗平滑肌细胞增殖、抗炎症、抗肿瘤及抗病毒等多种生物学功能[3]。肝素钠可以从猪、牛的小肠黏膜和牛肺等组织中提取，但由于疯牛病的出现，使牛源肝素钠的应用受到了限制[4]。不同动物来源的肝素钠具有不同的化学结构和生物活性，其不良反应也不同，牛源肝素钠引起血小板减少的不良反应约是猪源肝素钠的2倍[5]。《中华人民共和国药典》2020年版中明确规定，肝素钠应从检疫合格的猪肠黏膜中提取，并对肝素钠的动物来源进行种属鉴别[1]。因此，开发一种快速检测粗品肝素钠中反刍基因及猪基因的方法，对于判定肝素钠的动物来源尤为重要。作者采用细胞裂解和蛋白酶K消化技术，结合DNA制备柱选择性吸附DNA的方法提取粗品肝素钠中的动物DNA，将DNA标准溶液、粗品肝素钠DNA提取液分别与相应的PCR试剂混合，进行PCR扩增，测定粗品肝素钠DNA提取液中反刍基因及猪基因浓度。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

粗品肝素钠(猪源)，华北制药华坤河北生物技术有限公司；粗品肝素钠(羊源)，广东赛格生物技术有限公司。

基因组DNA小量试剂盒(DNA制备柱、核糖核酸酶A、裂解液、蛋白酶K、蛋白去除液、洗涤液、去盐液、洗脱液)，康宁生命科学(吴江)有限公司；……