凌旭坤 谢文鸿 张喆 胡琛

惠州市中心人民医院胃肠外科（广东惠州516200）

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是严重威胁全球人群健康的主要公共卫生问题之一，在男女性高发肿瘤中常年位居前3 位，且男性的发病率明显高于女性［1］。许多研究表明［2-3］，CRC 的发展与肿瘤细胞的恶性增殖和转移有关。因此，探讨CRC增殖和转移的分子机制对其临床治疗十分关键。

miRNA 的异常表达被证明与肿瘤细胞的增殖和转移密切相关，其可靶向下游mRNA，调控肿瘤的发展进程［4-6］。研究表明，miR⁃17⁃5p 与肿瘤的发生发展相关［7-9］。但miR⁃17⁃5p 在CRC 中的作用机制仍有待探讨。肌球蛋白调节轻链相互作用蛋白（myosin regulatory light chain interacting protein，MYLIP）参与细胞运动和迁移的调节［10-11］。通过生物信息学网站预测得知MYLIP 是miR⁃17⁃5p 的潜在靶基因，然而，目前还没有关于MYLIP 在CRC 发展过程中的重要作用的研究，因此，本文将探讨miR⁃17⁃5p 调控MYLIP 表达的潜在机制及其在CRC 增殖及转移中的作用，为寻找CRC 的有效治疗靶点探索新的道路。

1 材料与方法

1.1 组织标本、细胞系及主要试剂收集2017年12月至2018年1月在惠州市中心人民医院切除的60 例CRC 患者的癌及癌旁组织标本。研究方案征得医院伦理委员会批准。CRC 细胞系SW620（货号：ATCC CCL⁃227），Caco⁃2（货号：ATCC HTB⁃37），HT29（货号：ATCC HTB⁃38），Lovo细胞（货号：ATCC CCL⁃229）及结肠上皮细胞FHC（货号：ATCC CRL⁃1831）均购买自美国ATCC 公司。胎牛血清、RPMI⁃1640培养基购自美国Gibco公司，miR⁃17⁃5p抑制剂（miR⁃17⁃5p inhibitor）及其阴性对照（NC）和siRNAs购自上海吉玛制药技术公司，TRIzol RNA 提取试剂盒及SYBR PCR Master Mix 购自Thermo Fisher Scientific 公 司，LipofectamineTM2000转染质粒和siRNA 购自日本TaKaRa 公司，Transwell 小室购自Corning 公司，ECL 化学发光液购于美国BioRad 公司，逆转录试剂盒和双荧光素酶报告基因购自Pro⁃mega 公司，RIPA 细胞裂解液及BCA 试剂盒购于北京碧云天公司，一抗购于美国Abcam公司。……