李珊珊， 周伏忠， 刁文涛， 王雪妍， 冯 菲， 陈晓飞

（河南省科学院生物研究所有限责任公司，郑州 450008）

溶栓是预防和治疗血栓疾病的主要方法，但目前治疗该类疾病的药物均存在很多缺点，通过细菌发酵生产的纳豆激酶（NK），能很好地弥补传统溶栓药物的不足，有望成为临床上的第三代溶栓药物［1-4］. 以NK作为辅助溶栓的保健食品，已在欧美和日本盛行20多年，且在抗菌、抗线虫、防止骨质疏松、阿尔茨海默病治疗和临床手术中，同样具有不可估量的潜在应用价值［5-8］.

目前国内关于NK的报道，大多集中在固体发酵制备纳豆、纳豆胶囊、纳豆粉等保健食品方面，但固体发酵培养基成分复杂，不利于提纯等操作；而液体发酵工艺简单，易控制，规模易扩大，更适合工业化生产，且最重要的是有利于后期的纯化处理［9-10］. 目前关于我国NK的相关报道中，NK液体发酵酶活相对较低（大多在900～1300 IU/mL）［11-13］，不能满足工业生产的要求，因此获得高产NK的生产菌株和液体发酵工艺是其产业化的必经之路.

本研究用实验室复合诱变选育的5株NK高产突变菌株，通过随机组合的方法，筛选混菌发酵的菌株组合，随后通过单因素试验和正交试验确定最佳发酵工艺. 这种方法是通过两种或多种微生物的协同作用，共同完成发酵过程的混菌发酵技术，不需要进行复杂的DNA体外重组，却可以取得纯种培养无法达到的效果，如提高产品产量、改善产品品质及获得特殊代谢产物等［14］.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 本……