杨陈 曹小瑶 刘明宗 高榕茂

(四川省医学科学院·四川省人民医院(东院)ICU，四川 成都 610101)

急性胰腺炎(AP)是临床常见疾病且病死率极高，根据疾病严重程度分为轻度、中度及重度，其中重度AP患者预后较差且常伴随多种并发症导致患者死亡率升高〔1〕。胰腺腺泡细胞凋亡是AP发生及发展的重要因素，从防止胰腺腺泡细胞凋亡及促进细胞增殖的角度进行干预及治疗成为研究热点〔2〕。微小RNA(miRNA)异常表达可通过调控靶基因表达进而参与AP发生及发展过程〔3〕。研究表明，miR-324-5p在重度AP患者外周血中低表达，同时在缺氧/复氧心肌细胞损伤过程中miR-324-5p下调表达并可抑制心肌细胞凋亡〔4,5〕。然而关于miR-324-5p在AP腺泡细胞增殖及凋亡过程中的可能作用机制研究未见报道。通过靶基因网站预测到胱天蛋白酶募集域蛋白(CARD)9可能是miR-324-5p的靶基因，研究显示早期AP患者外周血CARD9蛋白和mRNA表达显著升高，且CARD9的表达水平与胰腺炎严重程度呈正相关〔6,7〕。但miR-324-5p和CARD9对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响，且miR-324-5p是否通过调控CARD9表达影响AP腺泡细胞增殖、凋亡目前还尚未可知。本研究通过雨蛙肽素处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J，观察miR-324-5p表达变化对AR42J细胞增殖及凋亡的影响，验证其与CARD9的靶向作用关系进而为提高临床AP治疗效果提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 胰腺腺泡细胞株AR42J购自美国American Type Culture Collection公司。雨蛙肽购自美国Sigma-Aldrich公司。CARD9 siRNA、si-NC均购自美国GeneCopopia公司；CARD9过表达慢病毒及其对照病毒均购自Polybrene Hanbio公司；miR-NC、miR-324-5p mimic、anti-miR-NC、miR-324-5p抑制剂(anti-miR-324-5p)均购自上海吉玛基因公司；胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基、青霉素-链霉素混合溶液、磷酸盐缓冲液(PBS)均购自美国Gibco公司；……