黄宇旻 李菊明 韦永中

(南京医科大学附属第一医院骨科，江苏 南京 210000)

骨肉瘤发病率较高且预后较差；骨肉瘤常以股骨远端、胫骨近端为起始侵袭部位，此后易发生以肺部为主的广泛性转移〔1〕。人肺腺癌转移相关转录本(MALAT)1是长链非编码RNA(lncRNA)家族的重要成员，既往研究已表明其与肺癌的侵袭能力有关，且参与多种肿瘤的增殖、转移、侵袭过程〔2〕。MALAT1可作为骨肉瘤预后的预测因子及治疗的潜在靶点，但其调控骨肉瘤细胞侵袭能力的机制尚未明确〔3〕。miR-205是具有抑癌作用的一类微小RNA(miRNA)可在多种恶性肿瘤中存在异常表达，影响肿瘤的侵袭过程〔4〕。本研究重点研究在骨肉瘤侵袭中，MALAT1与miR-205对于调控的影响机制。

1 材料与方法

1.1主要材料及试剂 骨肉瘤细胞(MG63细胞、Sao-2细胞)、正常成骨细胞(hFOB细胞)均来源于中国科学院细胞库。胎牛血清、Transwell室来源于北京优尼康生物科技有限公司，MALAT1干扰物(si-MALAT1)及其阴性对照(NC)、MALAT1、Lipofectamine3000来源于美国Amgen公司，miRNA逆转录试剂盒来源于美国Gene Copoeia公司，Roche荧光定量试剂盒来源于北京绿源伯德生物科技有限公司，miR-205模拟物及其NC来源于美国赛默飞世尔科技有限公司。

1.2方法

1.2.1实时荧光定量聚合酶链反应(QPCR) 采用含15%胎牛血清的RPMI1640培养基培养MG63、Sao-2及hFOB细胞，培养环境为37℃、5% CO2，取对数生长期细胞备用。提取各组细胞中的RNA，依据试剂盒说明书的要求将RNA逆转录为cDNA。反应条件：预变性90℃ 45 s、95℃ 10 s、60℃ 60 s为一个循环，共进行30个循环，每组依据重复原则进行3次。

1.2.2细胞转染实验 获取si-MALAT1与NC，利用Lipofectamine3000转染试剂对MG63、Sao-2细胞进行细胞转染实验，依据说明书进行操作，实验时间为48 h。……