赵唱，贺欣

（1.阜新市中心医院心内科，辽宁 阜新 123000；2.锦州医科大学第一附属医院心内三科，辽宁 锦州 121000）

近年来，研究发现同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）和糖尿病、高血脂一样，是心脑血管疾病的另一独立危险因素，其与CHD的关系受到临床广泛关注[1]。心血管疾病常常也与内皮一氧化氮合成酶（NOS3）基因多态性相关。NOS3为一氧化氮（NO）合成途径的关键酶，NO的生成受eNOS的影响，故心血管疾病的候选基因为eNOS[2]。eNOS 基因多态性位点有多个[3]，人们意识到遗传因素在冠心病的发病及发展中的重要作用[4]。本研究旨在探讨NOS3 的基因串联重复序列（VNTR）多态性与Hcy、冠心病的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年12月至2019年10月于本院住院和门诊就诊的经冠状动脉造影153 例患者为CHD 组，同时收集体检志愿者149名作为对照组。冠心病诊断标准：中华医学会急性非ST段抬高型ACS诊断和治疗指南及急性ST段抬高型心肌梗死诊断与治疗指南中颁布的ACS诊断标准。

1.2 方法

1.2.1 实验室检测方法 采集空腹12 h以上外周静脉血置于EDTA 抗凝，血浆-80 ℃冻存待测Hcy，血细胞作提取DNA用。Hcy通过用酶循环法测定（上海科华卓越生化分析仪），检测试剂批号：14030403（北京中生公司）。通过全自动生化仪（BeckmanDXC800）测定血脂、肾功、血糖。

1.2.2 DNA检测方法 试剂和仪器：采用人外周血DNA提取试剂盒（德国QIAGEN 公司），提取人基因组DNA，采用Nano-Drop检测基因组DNA浓度，基因组DNA置于-80 ℃贮存，应用毛细管凝胶电泳检测NOS3 VNTR 基因多态性。PCR 引物为：上游5’-AGGCCCTATGGTAGTGCCTTT-3’，下游5’-TCTCT-TAGTGCTGTGGTCAC-3’。PCR体系为：基因组DNA模板100 ng，上下游引物各2 μL，2×PCR MIX 25 μL，用ddH2O补足至50 μL。PCR 反应温度设置如下：94℃变性8 min，94 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，34个循环，72 ℃延伸8 min，PCR 产物4 ℃贮存。……