王雪敏，李明珠，李佳佳，薛晓阳，周守长（河北邯郸华裕农业科技有限公司 057150）

1 实验目的

对不同两个场区， 分别用两种方法进行同一种疫苗免疫，通过HI 抗体检测，评价免疫方法。

2 实验材料及鸡群

试验鸡群，某种鸡场A301 批次，420 日龄；某种鸡场B301批次，415 日龄。 免疫疫苗，T3 新支二联活疫苗 （VGGA+ma5+QX）。

3 实验分组

3.1 试验分组

试验组一（A 场）：某种鸡场A301 批次中固定30 只鸡，用T3 新支二联活疫苗（VGGA+ma5+QX)进行点眼免疫，免疫剂量为1 羽份，另固定饮水免疫的30 只鸡作为试验对比对象，免疫剂量为2 羽份。

试验组二 （B 场）： 某种鸡场B301 批次中固定30 只鸡，用T3 新支二联活疫苗（VGGA+ma5+Q)进行点眼免疫，免疫剂量为1 羽份，另固定饮水免疫的30 只鸡作为试验对比对象，免疫剂量为2 羽份。

3.2 检测时间

分别在免疫前1d、免疫后16d、免疫后30d 检测进行采样，采样鸡只包括固定的30 只点眼鸡只，以及固定的饮水免疫的30只鸡，通过HI 抗体检测。

4 检测方法

4.1 物品准备

一次性96 孔V 型反应板，移液器（配有一次性枪头；待检血清； 试验抗原； 生理盐水； 公鸡红细胞；100μL 单道移液器；100μL 八道移液器； 一次性移液器吸头；9cm 直径玻璃平皿；一次性96 孔v 型板；微量振荡器；离心机；10mL 离心管；一次性手套、一次性口罩、记号笔等材料。 ）

4.2 抗凝剂、1%鸡红细胞配比

采血：5mL 注射器吸取1mL 配置好浓度为3.8%的柠檬酸钠抗凝剂，采用翼根静脉方法进行采血。

红细胞的洗涤：将采集好的抗凝血注射到10mL 离心管中，向离心管中加满生理盐水并混匀， 放入离心机内配平，3000rpm离心3min 后，弃掉上清，重复清洗3 次，离心后得到的红细胞沉淀加入生理盐水后放置4℃冷藏备用。……