史巧霞 靳子明 张岩

甘肃中医药大学附属医院，甘肃 兰州730000

过量饮酒会导致呕吐恶心等，严重时甚至可因呼吸肌麻痹而导致死亡［1］。刘麒［2］等研究发现，高血压患者血压会随着酗酒量的增加而升高；杨家红［3］等研究表明胃癌等恶性疾病与过量饮酒有着直接联系；范建高等［4］研究发现少量或适量饮酒能够降低胆固醇水平、减少胰岛素抵抗，可以降低代谢综合征的发生，最终导致人体代谢综合征的发生。由葛根、人参等九味中药组成的解酒保肝方，在广泛使用后疗效可靠。方中葛根、人参具有生津止渴、利水消肿、防酒毒伤脾等作用，合用助解酒与扶正；蜂蜜调和诸药、兼以解酒护肝。全方具有益气扶正、生津止渴、解毒去湿之功效。由于本处方中药材大多数含有丰富的黄酮类成分，因此选用总黄酮作用评价指标，正交实验确定最佳提取条件，建立稳定的生产工艺。建立口服液的薄层色谱鉴别成分，进一步制备出疗效快、剂量准确、生物利用度高、易于规模化生产的口服液。

1 实验仪器、试剂与药材

1.1 实验仪器与试剂UV-3300型紫外可见分光光度计（上海美普达仪器有限公司）、KERN-ABJ型电子分析天平（上海实验器材有限公司）、YLA-2000型真空干燥箱（龙口市先科仪器公司）。芦丁对照品（上海源叶生物有限公司，批号：B20771）、硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司）。

1.2 实验药材 甘肃天士力中天药业有限责任公司提供。

2 方法与结果

2.1 解酒保肝口服液制备工艺研究 结合实际生产条件，解酒保肝口服液的制备主要采用水提法。采用正交试验设计，考察提取时间、料液比值、提取次数与总黄酮含量的关系，优化水提条件，确定最佳工艺。

2.1.1 标准曲线的制备。首先取芦丁对照品9.1mg，添补甲醇至25mL容量瓶中定容，得到对照品溶液。按等量递增取配好的芦丁溶液各0mL、1.0mL、2.0mL、3.0 mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL，移取到25mL容量瓶中，先用移液枪加5%的硝酸钠溶液1.0mL，摇匀后再加10%的硝酸铝溶液1.0mL，最后加4%的氢氧化钠溶液10.0 mL，添补甲醇到刻度25mL容量瓶的刻度线。设置紫外分光光度计的波长为510 nm，显示A值并记录。计算回归曲线时以浓度（mg/mL）为横坐标，A值为纵坐标，得到回归方程为y=12.792X-0.0052，R2=0.9996，表明芦丁在0~0.08736 mg/mL浓度范围内线性良好。见图1。

图1 芦丁对照品标准曲线图

2.1.2 水提工艺正交试验。①供试品溶液的制备：以提取时间、料液比值、提取次数三个因素，参照正交试验设计方法得到解酒保肝口服液水提工艺的L9（33）正交试验因素水平表。见表1。按正交设计表制备9份生药量为0.5mg/mL的解酒保肝口服液，分装在口服液瓶中，备用。②总黄酮含量测定：取9份上述正交设计得到的解酒保肝口服液各0.1mL于2mL容量瓶中，按“2.1.1”项下加硝酸钠溶液，氢氧化钠等反应试剂，添补甲醇定容。在510nm波长处记录A值，代入回归方程计算总黄酮含量。见表2。

表1 水提工艺L9（33）正交试验因素水平表

表2 解酒保肝口服液制备工艺参数确定正交试验结果

2.1.3 水提工艺实验结果。表3结果表明各因素对水提液中总黄酮含量影响的大小顺序为提取次数最大，提取时间次之，料液比值影响最小。由正交试验可得理论上最佳工艺为A3B3C3，但考虑到生产周期与成本，最终确定解酒保肝口服液的最佳提取条件为A2B2C2，即加15倍量水提取1 h，共提取2次。根据最佳工艺进行3次验证试验，得到总黄酮的平均含量为12.75 mg/mL，其RSD值为0.85%，小于1%，证明解酒保肝口服液选用以上最终提取工艺稳定可靠，可以为后续生产提供理论依据。

表3 方差分析表

2.2 解酒保肝口服液的薄层色谱鉴别

2.2.1 葛根色谱鉴别。取正交设计得到的解酒保肝口服液5mL水浴挥干，残渣用甲醇除杂后挥干，再添补甲醇至1mL容量瓶，备用。然后再取葛根素对照品1mg，添补甲醇至1mL容量瓶里，备用。后面再将处方中的葛根药材去除，将其余药材煎煮后制成缺葛根的阴性口服液样品。展开时用三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）的展开剂，倒入展开缸里先饱和15min；饱和后将点好的薄层板放进展开缸，展至距薄层板最上边缘2cm时停止展开，取出薄层板，晾干后置氨蒸气中熏15 min显色；显色后在紫外光灯（365nm）下检视斑点。见图2。在与供试品和对照药材色谱相应位置上，分别显相同的荧光斑点，阴性样品无明显斑点显现。

2.2.2 人参色谱鉴别。参照药典［5］，取正交设计得到的解酒保肝口服液5mL水浴挥干，残渣用三氯甲烷回流1h后挥干，加少量水湿润残渣，用水饱和正丁醇超声处理，使充分溶解，静置后吸取上清液，加3倍量氨试液，充分摇匀，放置分层，取上层液蒸干，再得残渣，将残渣转移至1mL容量瓶中，用1mL甲醇定容，作为供试品溶液。另取人参对照药材1g，同法制成人参对照药材溶液。将处方中的人参药材去掉，其余药材按比例制成缺人参的阴性口服液样品。再参照供试品溶液的制法，制成阴性对照溶液。毛细管吸取上述3种溶液点于同一硅胶G板上，展开剂选用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液。将展开剂提前倒入展开缸饱和。饱和后再放入点好样的薄层板，展至距薄层板最上边缘2cm时停止展开取出，晾干后用显色瓶喷10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光和紫外灯下（365nm）下观察斑点。见图2。在与供试品和对照药材色谱相应位置上，分别显相同的荧光斑点，阴性样品有斑点显现，但与供试品和对照药材斑点均不在同一位置。

3 讨论

本实验采用正交试验设计，以总黄酮的含量为评价指标，对解酒保肝口服液的提取工艺进行优化，结果显示，影响解酒保肝口服液的提取因素大小顺序为提取次数＞提取时间＞料液比值，最终结合实际生产确定其最佳提取工艺为A2B2C2，即15倍量水煎煮2次，每次1h。根据正交设计表可看出，其理论上最佳提取条件为20倍量水提取3次，每次1.5h，但该条件下提取液体积较大，再结合生产周期与成本考虑舍弃该条件。本处方中枳椇子、葛根、葛花、红芪等均含有丰富的黄酮类化合物，其中以君药枳椇子含量居多。总黄酮是植物次生代谢产物，在植物中广泛存在，以游离态或与糖结合为苷的形式存在，研究表明，总黄酮类化合物具有降血糖、抗炎抗菌、抗氧化抗肿瘤等多种药理作用［6-9］，因此本研究以黄酮类为评价指标，具有较大的考察意义。

图2 葛根、人参药材薄层色谱图

解酒保肝口服液的薄层色谱中，供试品与葛根对照药材在相对应的位置上显现出相同的斑点，葛根阴性对照中无明显斑点出现。其供试品与人参对照药材也在相对应的位置上显现相同的斑点，人参阴性对照药材中有斑点显现，但与供试品和对照药材斑点均不在相同位置。因此，本研究为解酒保肝口服液的合理开发利用提供了一定的科学依据。