彭 程，刘 朔，张 琳，2，李金平，于晓慧，侯广宇，王静静，李 阳，蒋文明，刘华雷

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2.山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271000）

禽流感病毒（avian influenza virus，AIV），属于正黏病毒科A 型流感病毒属，可引起禽类和哺乳动物的高度传染性呼吸道疾病[1]。根据其致病性不同和HA 蛋白裂解位点处的分子特征，可将AIV 分为高致病性禽流感病毒（highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV）和低致病性禽流感 病 毒（low pathogenic avian influenza virus，LPAIV）[2-3]，其中HPAIV 主要包括H5 和H7 亚型，引起的高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza，HPAI）不仅严重危害养禽业发展，亦严重威胁人类健康，因而被世界动物卫生组织（OIE）列为须通报动物疫病，在我国被列为一类动物疫病。

自A/goose/Guangdong/1/1996（H5N1）HPAIV 报道以来，全球H5 亚型HPAIV 暴发数逐渐增多，病毒也进化为10 个分支，内部超过30 个亚分支[4-5]。在H5 亚型HPAIV 中，第2.3.4.4 分支和第2.3.2.1 分支病毒在亚洲地区（如中国、越南、韩国等）家禽中呈地方性流行[6-7]。第2.3.2.1 分支于2004 年首次在香港发现，之后病毒逐渐进化为2.3.2.1a、2.3.2.1b、2.3.2.1c、2.3.2.1d 和2.3.2.1e 等5 个小分支[8-9]。第2.3.4.4 分支病毒在亚洲、北美、欧洲、非洲等地区暴发和流行[10-12]。近年来，我国流行的H5 亚型HPAIV 为第2.3.2.1 和第2.3.4.4 分支，且这两个分支病毒具有不同的抗原特性，对应的疫苗毒株也不同。因此，临床上需要对H5 亚型HPAIV 进行快速准确诊断和分支区分。

分子诊断是鉴定和控制HPAI 疫情的第一步。当前，许多实验室建立了多种诊断方法，如DNA芯片、环介导等温扩增方法以及限制性片段长度多态性分析等[13-16]，用来快速区分HA 亚型，其中最常用的是实时荧光RT-PCR 方法。这些方法虽然可以对病毒进行亚型鉴定，但不能进行分支鉴定，还需要通过测序等技术进一步分析。……