刘加彬,张瑞梅,刘成永

耐药结核的出现，给中国乃至世界的结核病诊疗与控制工作带来严峻挑战。世界卫生组织列出的30个高结核病负担国家在全球的病例中，印度占27%，中国占9%，中国位列全球第二[1]。中国结核病报告发病人数始终位居法定乙类传染病前列[2]。研究发现结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药与katG、inhA、aphC，利福平(RFP)与rpoB等相关耐药基因突变有关，并且不同的国家和地区结核分枝杆菌耐药相关基因的突变特点也不相同[3]。

我们的研究就是基于聚合酶链式反应(PCR)和反向点杂交(RDB)相结合的基因芯片技术,随机抽取徐州地区耐多药结核(MDR-TB)分枝杆菌，分析和发现本地区MDR-TB耐药情况和相关基因突变特征，为耐多药结核的快速诊疗和精准控制提供科学依据。

1 材料与方法

1.1数据来源 研究涉及的MDR-TB菌株115株，敏感菌株66株来自徐州市传染病医院、徐州市疾控中心及徐州市10县(市)、区结核病监测点实验室。菌株的传代、培养和保存均由徐州市传染病院完成。结核分枝杆菌标准株 H37RV 由中国结核病控制中心临床中心参比室提供。

1.2结核分枝杆菌改良罗氏比例法药物敏感试验[4]改良罗氏比例法培养基内含药浓度按照中国防痨协会推荐的耐药标准：INH(0.2 μg/mL)、RFP(40 μg/mL)、SM(4 μg/mL)、EMB(2 μg/mL)、KM(30 μg/mL)、OFX(2 μg/mL)。

1.3结核分枝杆菌鉴定 用对硝基苯甲酸(PNB)法[4]

1.4药敏培养基[4]抗痨药物异烟肼(isoniazid，INH)和利福平(rifampicin，RFP)、乙胺丁醇(ethambutol，EMB)、氧氟沙星(ofloxacin，OFX)、链 霉 素(SM)、卡那霉素(kanamycin，KM)均由徐州市传染病院提供。

1.5结核分枝杆菌耐多药基因芯片分析[5]结核杆菌(TB)全基因组有4 411 529 bp,约包括4 000个基因。研究发现TB耐药性的发生与其基因突变相关。……